我國目前仍有逾9000萬慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者，現(xiàn)有治療下功能性治愈仍然存在諸多挑戰(zhàn)。華山感染科團隊在大型真實世界隊列和隨機對照臨床研究中，明確了即便采用序貫聯(lián)合等優(yōu)化策略和優(yōu)勢人群選擇，核苷與干擾素等現(xiàn)有抗病毒治療實現(xiàn)功能性治愈的概率仍然有限，即使在嚴格篩選患者后，核苷停藥仍會有一定的病毒復發(fā)概率。團隊在前期工作中，HBV核酸原位雜交檢測（RNAscope）和免疫組化驗證，觀察到在長期NA抗病毒治療，或IFN足療程治療后，數(shù)量顯著減少但持續(xù)存在HBV RNA陽性細胞，這些細胞即為狡詐的乙肝病毒慢性感染后藏匿在肝臟內(nèi)的“儲存庫”，是功能性治愈難以實現(xiàn)和停藥后復發(fā)的主要原因，其難以被藥物或免疫徹底清除的機制待進一步明確。

近日，復旦大學附屬華山醫(yī)院感染科張文宏教授、仇超教授團隊聯(lián)合多家單位，在肝病領域國際權威期刊Hepatology 上發(fā)表了一項題為"Host-viral interaction of HBV infection revealed by single-cell transcriptome jointly profiling the viral replication state"重磅研究。

該團隊自主研發(fā)了一項名為B-BEST 的基于單細胞測序的新技術，突破了傳統(tǒng)技術瓶頸，首次在單細胞水平上“看清”了乙肝病毒在肝細胞內(nèi)的真實狀態(tài)，為乙肝功能性治愈提供了全新的視角。傳統(tǒng)檢測主要靠抽血或分析肝組織，只能看病毒mRNA或蛋白（如HBsAg、HBcAg），而且一次只能測一兩個指標，信息很粗糙，殘留“頑固”細胞的比例很少。所以無法明確病毒具體感染了哪些肝細胞、病毒這些“頑固”細胞里是活躍復制還是靜靜儲存，也不知道這些細胞怎樣影響肝臟炎癥病理損傷。這些問題一直困擾著科學家。

隨著單細胞測序發(fā)展，讓我們有望更精細地研究病毒和宿主的關系。然而，傳統(tǒng)單細胞測序方法中更適用于檢測人的信息，難以有效捕獲低拷貝的HBV序列，導致感染病毒的細胞檢出率低。打個比方，來源于人的細胞的核酸序列像海水一樣多，想抓到里面的病毒核酸，無異于大海撈針。

該團隊研發(fā)的B-BEST 技術，在常規(guī)“釣竿”上加了5個專門抓捕病毒的“自動魚鉤”，能高效捕捉到乙肝病毒的多個關鍵區(qū)域（S、X、pgRNA、rcDNA、cccDNA）。相比傳統(tǒng)方法，對病毒序列的檢測效率提高了100倍以上，解決了低豐度病毒核酸難以捕獲的難題；結(jié)合高通量單細胞技術，可以一次性捕獲并同時分析數(shù)萬個細胞，突破了關鍵技術瓶頸。

同時，該團隊還從單細胞水平精準呈現(xiàn)了HBV對宿主細胞的選擇性、HBV復制對宿主代謝機制的依賴、HBV感染后肝細胞的響應和清除作用、HBV的免疫逃逸等方面，描述了HBV感染過程中的宿主-病毒交互作用，為乙肝病毒持續(xù)感染和功能性治愈的機制提供了新的視角與思路。未來，隨著多組學技術和臨床抗病毒治療新藥的迭代，B-BEST將持續(xù)助力科研人員為終結(jié)乙肝威脅提供更精準的科學支撐和突破路徑。

本文轉(zhuǎn)載自 ：華山感染

本期編輯：木木