2026 年 3 月 18 日，《自然》（Nature）在線發(fā)表了一項(xiàng)顛覆性研究成果。由 Jennifer A. Doudna 等頂尖科學(xué)家領(lǐng)銜的團(tuán)隊(duì)，開發(fā)出一套創(chuàng)新的雙載體遞送體系，通過聯(lián)合使用包膜脫氧核糖核酸病毒（EDV）與 T 細(xì)胞定向進(jìn)化的腺相關(guān)病毒（AAV），精準(zhǔn)完成了 CRISPR-Cas9 基因編輯工具和 CAR 轉(zhuǎn)基因的 T 細(xì)胞特異性遞送與位點(diǎn)整合。該技術(shù)首次在人源化小鼠體內(nèi)直接生成了達(dá)到治療劑量的功能性 CAR-T 細(xì)胞，為解決傳統(tǒng)細(xì)胞療法的核心痛點(diǎn)提供了全新路徑。

核心研究成果1. 雙載體協(xié)同實(shí)現(xiàn) TRAC 位點(diǎn)高效精準(zhǔn)敲入

研究人員設(shè)計(jì)了分工明確的雙載體系統(tǒng)：Cas9-EDV 載體負(fù)責(zé)遞送 CRISPR-Cas9 核糖核蛋白復(fù)合物，在 T 細(xì)胞基因組的 TRAC 位點(diǎn)制造特異性雙鏈斷裂；HDRT-AAV 載體則攜帶同源定向修復(fù)模板，提供 CAR 轉(zhuǎn)基因的供體 DNA。兩者聯(lián)合作用時(shí)，可將 CAR 基因精準(zhǔn)插入 T 細(xì)胞受體 α 鏈恒定區(qū)（TRAC）這一 "安全位點(diǎn)"。

體外實(shí)驗(yàn)顯示，該系統(tǒng)在人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中的 CAR 整合效率最高可達(dá) 67.2%；在 NSG 人源化小鼠體內(nèi)，靜脈注射雙載體后第 14 天，即可在脾臟和外周血中檢測到穩(wěn)定表達(dá)的 TRAC-CAR T 細(xì)胞，且這些細(xì)胞能夠正常增殖和分化。

2. 定向進(jìn)化與靶向修飾大幅提升遞送特異性

為解決傳統(tǒng) AAV 載體 T 細(xì)胞靶向性不足的問題，研究團(tuán)隊(duì)對 AAV6 衣殼進(jìn)行了多輪 T 細(xì)胞定向進(jìn)化篩選，獲得了新型變體 AAV-hT7。與野生型 AAV6 相比，AAV-hT7 對人 T 細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率提升了約 10 倍，同時(shí)顯著降低了對 NK 細(xì)胞、造血干細(xì)胞等非靶細(xì)胞的非特異性轉(zhuǎn)導(dǎo)。

此外，研究人員將 EDV 載體的 VSVG 包膜蛋白替換為抗 CD3 單鏈抗體，使其能夠特異性識(shí)別 T 細(xì)胞表面的 CD3 分子。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，抗 CD3-EDV 與 AAV-hT7 的組合實(shí)現(xiàn)了近乎絕對的 T 細(xì)胞特異性遞送，幾乎不轉(zhuǎn)導(dǎo) CD4 + 和 CD8+ T 細(xì)胞以外的其他細(xì)胞類型。

3. 體內(nèi)生成的 CAR-T 細(xì)胞保留完整免疫功能

全面的功能表征結(jié)果顯示，體內(nèi)重編程產(chǎn)生的 TRAC-CAR T 細(xì)胞不僅高表達(dá) CAR 分子，還維持了健康的 T 細(xì)胞表型。這些細(xì)胞中同時(shí)存在 CD4 + 輔助性 T 細(xì)胞和 CD8 + 細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞亞群，且含有較高比例的 TCF1 + 干性記憶 T 細(xì)胞和較低比例的 TOX + 耗竭 T 細(xì)胞，這一特征預(yù)示著它們具有更強(qiáng)的長期抗腫瘤活性和體內(nèi)持久性。

4. 白血病模型中療效超越傳統(tǒng)慢病毒 CAR-T

在 B 細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血?。˙-ALL）的 NSG 小鼠模型中，單次靜脈注射 EDV/AAV 雙載體系統(tǒng)，即可在體內(nèi)快速生成足夠數(shù)量的 CAR-T 細(xì)胞，有效清除腫瘤細(xì)胞并顯著延長小鼠生存期。

頭對頭比較實(shí)驗(yàn)表明，體內(nèi)生成的 TRAC-CAR T 細(xì)胞療效優(yōu)于相同劑量的傳統(tǒng)體外慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo) CAR-T 細(xì)胞。即使在低劑量下，體內(nèi)療法仍能表現(xiàn)出良好的抗腫瘤效果，而傳統(tǒng)慢病毒 CAR-T 細(xì)胞在相同劑量下幾乎無效。

5. 廣譜抗腫瘤活性覆蓋血液腫瘤與實(shí)體瘤

該技術(shù)具有出色的通用性。通過更換 CAR 轉(zhuǎn)基因，研究人員成功在體內(nèi)生成了靶向 BCMA 的 CAR-T 細(xì)胞，在多發(fā)性骨髓瘤小鼠模型中取得了顯著療效。更令人振奮的是，靶向 B7H3 的 CAR-T 細(xì)胞在 MES-SA 肉瘤實(shí)體瘤模型中表現(xiàn)出強(qiáng)大的抗腫瘤活性，6 只治療小鼠中有 5 只實(shí)現(xiàn)了完全緩解（CR），且在腫瘤再攻擊實(shí)驗(yàn)中仍能保持保護(hù)作用。

研究意義與展望

這項(xiàng)研究是細(xì)胞療法領(lǐng)域的里程碑式突破。它首次實(shí)現(xiàn)了在活體動(dòng)物體內(nèi)對 T 細(xì)胞進(jìn)行位點(diǎn)特異性的基因工程改造，徹底擺脫了傳統(tǒng) CAR-T 療法依賴體外白細(xì)胞分離、細(xì)胞擴(kuò)增和回輸?shù)膹?fù)雜流程。

這一進(jìn)展不僅將大幅降低細(xì)胞療法的生產(chǎn)成本和治療周期，還能避免體外培養(yǎng)過程中 T 細(xì)胞的分化和耗竭，顯著提升治療效果。同時(shí)，該技術(shù)的通用性使其能夠快速適配不同的腫瘤靶點(diǎn)，為開發(fā) "即插即用" 型的廣譜細(xì)胞療法鋪平了道路。未來，隨著臨床轉(zhuǎn)化研究的推進(jìn)，體內(nèi)重編程 T 細(xì)胞技術(shù)有望讓 CAR-T 療法從 "天價(jià)定制" 走向 "普惠大眾"，為全球癌癥患者帶來新的希望。

參考文獻(xiàn)：In vivo site-specific engineering to reprogram T cells. Nature. 2026 Mar 18. doi: 10.1038/s41586-026-10235-x. PMID: 41851456.

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