為了防止水產(chǎn)動物疫病的發(fā)生，國內(nèi)外均致力于尋求高效、快速、廣譜的消毒劑。其消毒效果往往受到微生物的種類、PH、溫度、濃度、有機物等因素的影響。

為了解坤源“滅毒威”的消毒效果，本試驗選用了舒伯特氣單胞菌(Aeromonas schubertii)、維氏氣單胞菌(Aeromonasveronii)、愛德華氏菌(Edwardsiellatarda,Et)、嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)進行抑菌試驗，為評價該消毒劑殺滅效果提供依據(jù)。

1.材料

1.1供試藥劑

坤源“滅毒威”

1.2供試菌株

舒伯特氣單胞菌(Aeromonas schubertii)、維氏氣單胞菌(Aeromonasveronii)、愛德華氏菌(Edwardsiellatarda,Et)、嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)以上待測菌株由湖南坤源生物科技有限公司微生物實驗室保存。

1.3儀器

恒溫培養(yǎng)箱、移液槍、潔凈工作臺、恒溫振蕩器、高壓蒸汽滅菌鍋等

1.4培養(yǎng)基

LB液體培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基

1.5耗材及試劑

96孔板、移液槍槍頭、離心管、無菌水、無菌PBS、TTC等。

2. 試驗時間：

2022年11月16日—11月19日

3. 試驗地點：

本公司研發(fā)中心微生物室

4. 試驗方法

4.1 菌株的活化培養(yǎng)：取出保存的菌株，在LB平板上劃線活化，于28℃的恒溫培養(yǎng)箱中倒置過夜培養(yǎng)；

4.2 待LB平板上長出單菌落后，挑取單菌落接種于10mL的LB液體培養(yǎng)基中搖瓶培養(yǎng)，置于28℃下，180rpm/min搖床中培養(yǎng)24h；

4.3 將培養(yǎng)過夜的菌液按梯度稀釋，涂布于LB平板，置于28℃的恒溫培養(yǎng)箱中倒置過夜培養(yǎng)；

4.4 活菌平板計數(shù)；

4.5 以舒伯特氣單胞菌、維氏氣單胞菌、愛德華氏菌、嗜水氣單胞菌四種水產(chǎn)致病菌為受試菌株、利用微量稀釋法測定坤源“滅毒威”的最小抑菌濃度；

4.6 將坤源“滅毒威”加入每孔載有100微升LB液體培養(yǎng)基96孔板中，采用二倍稀釋法使第1孔至第10孔的濃度為1024ppm到2ppm；

4.7 將8行孔分為4組，由上至下分別為舒伯特氣單胞菌、維氏氣單胞菌、愛德華氏菌、嗜水氣單胞菌，每種菌兩個平行，各組1至10孔每孔各自加入100uL濃度1.5*106 CFU/mL的菌液，第11孔加等量藥液和液體培養(yǎng)基不加菌液為空白對照，第12孔加菌液不加藥液，為陽性對照。

4.8 放入恒溫培養(yǎng)箱28℃培養(yǎng)，將96 孔板在規(guī)定的溫度下培養(yǎng)24h 后，每孔加入 0.25% TTC 5微升，繼續(xù)培養(yǎng)2h，觀察培養(yǎng)孔，呈現(xiàn)紅色為有細菌生長，每個平行中無細菌生長對應(yīng)的最低濃度即為最小抑菌濃度(MIC)。

5.結(jié)果

+++代表有菌生長；---代表無菌生長

本試驗測定了不同濃度的坤源“滅毒威”對舒伯特氣單胞菌、維氏氣單胞菌、愛德華氏菌、嗜水氣單胞菌這4種病原菌的抑菌效果，試驗結(jié)果表明：

（1）坤源“滅毒威”對舒伯特氣單胞菌最小抑菌濃度（MIC)為8ppm；

（2）坤源“滅毒威”對維氏氣單胞菌最小抑菌濃度（MIC)為4ppm；

（3）坤源“滅毒威”對愛德華氏菌最小抑菌濃度（MIC)為4ppm；

（4）坤源“滅毒威”對嗜水氣單胞菌最小抑菌濃度（MIC)為8ppm。

備注：1ppm=1mg/L

實驗結(jié)果附圖

6.實驗結(jié)論

本研究測定了不同濃度的坤源“滅毒威”對四種常見的水產(chǎn)致病菌（舒伯特氣單胞菌、維氏氣單胞菌、愛德華氏菌、嗜水氣單胞菌）的最低抑菌濃度，結(jié)果顯示坤源“滅毒威”對上述四種致病菌均具有優(yōu)異的抑菌效果，適用于廣大養(yǎng)殖戶在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中利用消毒劑消毒時提供參考。

附圖：本公司研發(fā)中心實驗室

研發(fā)中心實驗室

無菌操作室

微生物無菌室平面圖

生物安全柜

恒溫振蕩器

恒溫培養(yǎng)箱

微生物實驗員進行實驗操作