嗜肺軍團(tuán)菌檢測(cè)試劑盒酶聯(lián)免疫法

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：嗜肺軍團(tuán)菌IgG檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

編制：深圳市恒昊生物科技有限公司

【預(yù)期用途】

本試劑盒可用于定性檢測(cè)人血清或血漿（檸檬酸鹽、肝素）中抗嗜肺軍團(tuán)菌的IgG類抗體。

【前言簡(jiǎn)介】

軍團(tuán)菌是某些原生動(dòng)物的需氧革蘭氏陰性兼性胞內(nèi)寄生蟲。它們存在于世界各地的淡水環(huán)境中，可引起人類呼吸道疾?。ㄜ妶F(tuán)病）。軍團(tuán)菌是在費(fèi)城一家酒店的1976年美國(guó)退伍軍人大會(huì)代表們爆發(fā)肺炎后首次發(fā)現(xiàn)的。軍團(tuán)菌屬目前至少有50個(gè)物種，包括70個(gè)不同的血清群。軍團(tuán)菌的一種，嗜肺乳桿菌，是大約90%的軍團(tuán)病病例的病原體，血清組1(Sg1)約占這些病例的84%。嗜肺軍團(tuán)菌在25~42°C的溫度下繁殖，最適生長(zhǎng)溫度為35°C。軍團(tuán)菌在環(huán)境中的溫暖、死水和人工系統(tǒng)中生長(zhǎng)，如冷卻塔、蒸發(fā)冷凝器、冷熱水系統(tǒng)和模擬生物生長(zhǎng)的自然環(huán)境的溫泉池。這些系統(tǒng)還提供了產(chǎn)生氣溶膠/液滴和生物體分散到大氣中的方法。軍團(tuán)病可通過吸入含有軍團(tuán)菌的氣溶膠或微吸被軍團(tuán)菌污染的攝入水而獲得。人與人之間的傳播被認(rèn)為不是一種風(fēng)險(xiǎn)。感染軍團(tuán)病的可能性取決于水源中的污染程度、暴露者的易感性和暴露者的強(qiáng)度。軍團(tuán)病的特征是一種“機(jī)會(huì)性”疾病，攻擊患有潛在疾病或免疫系統(tǒng)薄弱的人。易感風(fēng)險(xiǎn)包括年齡增長(zhǎng)、男性、嚴(yán)重吸煙、酗酒、慢性肺部疾病、免疫抑制治療、癌癥化療、器官或骨髓移植和皮質(zhì)類固醇治療。軍團(tuán)菌病可出現(xiàn)在兩種不同的臨床表現(xiàn)中：肺炎軍團(tuán)菌?。ㄜ妶F(tuán)?。?，潛伏期約為。2-10天（可延長(zhǎng)至16-20天）和龐提亞克熱（潛伏期：通常為12-48小時(shí)）。軍團(tuán)菌肺炎（軍團(tuán)病）是一種嚴(yán)重的肺炎，其病死率為10-15%。軍團(tuán)病患者最初表現(xiàn)為咳嗽、發(fā)燒和非特異性癥狀，包括不適、肌痛和頭痛。一些患者會(huì)出現(xiàn)顫抖、寒戰(zhàn)、胸痛、腹瀉、精神錯(cuò)亂或其他神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。肺外受累是罕見的。龐提亞克熱是一種較輕的疾病，無(wú)肺炎的表現(xiàn)，表現(xiàn)為一種流感樣疾病。癥狀可能包括頭痛、寒戰(zhàn)、肌肉疼痛、干咳和發(fā)燒。它通常是自限性的，通常不需要治療。發(fā)作率遠(yuǎn)高于軍團(tuán)病患者（高達(dá)95%）。

咳嗽、發(fā)熱和非特異性癥狀（不適、肌痛、頭痛)。一些患者會(huì)出現(xiàn)寒顫、胸痛、腹瀉、精神錯(cuò)亂或其他神經(jīng)系統(tǒng)癥狀

流感樣疾病（頭痛、寒戰(zhàn)、肌肉疼痛、干咳和發(fā)燒），無(wú)肺炎表現(xiàn)

吸入含有軍團(tuán)菌的氣溶膠或微滴吸入被軍團(tuán)菌污染的水

【檢測(cè)原理】

特異性抗體的定性免疫酶學(xué)測(cè)定是基于ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）技術(shù)。微孔板上包被特定的抗原，以結(jié)合樣品的相應(yīng)抗體。洗滌微孔以去除所有未結(jié)合的樣品材料后，添加酶聯(lián)物，與捕獲的抗體結(jié)合。在第二個(gè)洗滌步驟中，未結(jié)合的共軛物被去除。通過加入四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物，得到藍(lán)色反應(yīng)產(chǎn)物，可以觀察到結(jié)合結(jié)合物形成的免疫復(fù)合物。該產(chǎn)品的強(qiáng)度與樣品中特異性抗體的數(shù)量成正比。加入終止液以終止反應(yīng)，藍(lán)色變成了黃色。使用酶標(biāo)儀器讀取450/620nm處的吸光度。

【試劑盒組成】

1）微孔板12x8

2）樣品稀釋液1×100ml，pH 7.2 ± 0.2，即用型

3）終止液1×15ml，即用型

4）洗滌濃縮液20倍濃縮，1×50ml，pH 7.2 ± 0.2

5）酶聯(lián)物1×20ml，即用型

6）底物液1×15ml，即用型

7）陽(yáng)性質(zhì)控1×2ml，即用型

8）臨界質(zhì)控1×3ml，即用型

9）陰性質(zhì)控1×2ml，即用型

10）封板紙1x

11）使用說(shuō)明書1x

12）布局表1x

【所需的材料和設(shè)備】（未提供）

1）酶標(biāo)儀

2）37℃培養(yǎng)箱

3）手動(dòng)或自動(dòng)洗板裝置

4）移液器：10-1000μL

5）渦旋混合器

6）蒸餾水

7）一次性試管

【儲(chǔ)存條件】

試劑盒必須儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境中，打開的試劑在標(biāo)簽上規(guī)定的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

【試劑準(zhǔn)備】

將所有的試劑和樣品平衡至室溫(20-25°C)，并在開始測(cè)試運(yùn)行前進(jìn)行混合是非常重要的！

洗滌液

用蒸餾水根據(jù)1+19稀釋洗滌濃縮液，例如，10 mL洗滌濃縮液+190mL蒸餾水混合。稀釋的洗滌液在室溫下（20-25℃）可保存5天，如果在濃縮液中出現(xiàn)晶體，則將溶液加熱至37°C，例如在水浴中。稀釋前攪拌均勻。

底物液

試劑為即用型，不需要稀釋。必須儲(chǔ)存在2-8°C，避光。溶液應(yīng)該是無(wú)色的，或者可以有一個(gè)輕微的藍(lán)色色調(diào)。如果基質(zhì)變成藍(lán)色，它可能已經(jīng)被污染了，應(yīng)該被扔掉。

【樣品采集和制備】

使用人血清或血漿（檸檬酸、肝素）樣品。如果在樣品采集后5天內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，樣品應(yīng)保持在2-8°C；否則應(yīng)分裝并深度冷凍保存(-70至-20°C)。如果樣品是冷凍保存的，在檢測(cè)前將解凍的樣品混合。避免反復(fù)凍結(jié)和解凍。不建議對(duì)樣品進(jìn)行熱失活。

樣品稀釋

檢測(cè)前，所有樣品應(yīng)用IgG樣品稀釋緩沖液稀釋1+100。將10μL樣品和1 mL IgG樣品稀釋緩沖液加入試管中，渦旋混勻。

檢測(cè)步驟

1）加100μL標(biāo)準(zhǔn)品或質(zhì)控品和稀釋的樣品至相應(yīng)的微孔中，保留A1為空白對(duì)照。

2）用提供的封板紙封板。

3）37± 1 °C孵育1小時(shí)± 5 分鐘。

4）棄掉微孔中的內(nèi)容物，用稀釋的洗滌液沖洗孔3次(每次每孔300μL)。洗滌和吸入的時(shí)間間隔應(yīng)>5s。在吸收性紙上用力擊打微孔板，以去除殘留的液滴。

5）加100μL酶聯(lián)物至每個(gè)微孔中，除了空白孔。

6）室溫下（20-25℃）避光孵育30分鐘。

7）重復(fù)步驟4。

8）加100μL底物液至每個(gè)微孔中。

9）在黑暗環(huán)境中室溫下孵育15分鐘。

10）加100μL終止液至每個(gè)微孔中。

11）在加入終止液后的30分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀讀取在450/620nm處的吸光度

【結(jié)果】

運(yùn)行驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)：

為了使試驗(yàn)運(yùn)行有效，必須嚴(yán)格遵守這些使用說(shuō)明，并必須滿足以下標(biāo)準(zhǔn)：

空白對(duì)照：吸光度值<0.100

陰性質(zhì)控：吸光度值<0.200和<臨界值

臨界質(zhì)控：吸光度值0.150-1.300

陽(yáng)性質(zhì)控：吸光度值>臨界值

如果不滿足這些標(biāo)準(zhǔn)，則該檢測(cè)無(wú)效，必須重復(fù)檢測(cè)。

結(jié)果計(jì)算：

臨界值是雙孔臨界質(zhì)控吸光度的平均值。

例如，臨界質(zhì)控吸光度0.44+臨界質(zhì)控吸光度0.42=0.86/2=0.43

臨界值=0.43

結(jié)果單位[NTU]

樣品平均吸光度x10/臨界值=NTU

例如，1.591x10/0.43=37 NTU