斑馬魚(yú)外周疼痛模型是一種快速、高通量、非侵入性的炎癥性疼痛研究平臺(tái)，廣泛用于鎮(zhèn)痛藥物的篩選與評(píng)價(jià)。該模型利用佛波酯（Phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA）一種強(qiáng)效蛋白激酶C（PKC）激活劑局部刺激斑馬魚(yú)幼魚(yú)，誘發(fā)外周神經(jīng)敏化和炎癥反應(yīng)，模擬哺乳動(dòng)物的外周傷害性疼痛狀態(tài)。

斑馬魚(yú)外周疼痛模型構(gòu)建

選取4日齡（4 dpf）的AB系斑馬魚(yú)幼魚(yú)，置于6孔板中（每孔20尾），分為以下組：

• 對(duì)照組（僅胚胎用水）

• 模型組

• 陽(yáng)性對(duì)照組（3.0 μg·mL?1 阿司匹林）

• 測(cè)試藥物組

每日更換含藥或?qū)φ杖芤?，連續(xù)處理3天（至7 dpf），期間每日觀察幼魚(yú)存活率與活動(dòng)狀態(tài)，剔除死亡或異常個(gè)體。

給藥結(jié)束后，小心移取各組健康幼魚(yú)至24孔板，每孔1尾，加入1.5 mL胚胎用水。適應(yīng)性培養(yǎng)30分鐘（28.5℃避光）。除對(duì)照組繼續(xù)保留在胚胎用水中外，其余各組（模型組、陽(yáng)性藥組以及測(cè)試藥物組）均轉(zhuǎn)移至新24孔板，孔內(nèi)預(yù)先加入 1.5 mL 含1 μg·mL?1 佛波酯的溶液，每孔1尾。將24孔板置于28.5℃避光環(huán)境中，孵育30分鐘，使炎癥性外周疼痛模型充分建立。

當(dāng)斑馬魚(yú)暴露于無(wú)法逃避的傷害性刺激（如佛波酯誘導(dǎo)的炎癥）時(shí)，其運(yùn)動(dòng)行為會(huì)發(fā)生特征性改變，表現(xiàn)為活動(dòng)減少、快速游動(dòng)次數(shù)和距離顯著下降。

隨后，使用斑馬魚(yú)行為分析系統(tǒng)記錄各組幼魚(yú)10分鐘內(nèi)的自由運(yùn)動(dòng)軌跡，定量評(píng)估頸痛顆粒對(duì)外周疼痛的鎮(zhèn)痛效果。

評(píng)估參數(shù)

在斑馬魚(yú)外周疼痛模型中，疼痛本身無(wú)法直接測(cè)量，但可通過(guò)其引發(fā)的可量化行為學(xué)改變間接反映疼痛強(qiáng)度。

總運(yùn)動(dòng)距離；

快速運(yùn)動(dòng)次數(shù)與距離（設(shè)定速度閾值，如 > 20 mm/s）；快速游動(dòng)代表逃避/探索動(dòng)機(jī)；疼痛抑制此類主動(dòng)行為。

慢速運(yùn)動(dòng)次數(shù)與距離（速度 ≤ 20 mm/s）；

靜止時(shí)間、移動(dòng)時(shí)間等輔助指標(biāo)。

模型優(yōu)勢(shì)

• 無(wú)需手術(shù)或電刺激，操作簡(jiǎn)便；

• 高通量：?jiǎn)未慰蓽y(cè)試數(shù)十至上百尾幼魚(yú)；

• 行為響應(yīng)穩(wěn)定、可重復(fù)，對(duì)經(jīng)典鎮(zhèn)痛藥（如阿司匹林、布洛芬）敏感；

• 適用于天然產(chǎn)物及小分子化合物的初篩。

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