前言

肝內膽管癌（ICC）是第二常見的肝癌類型，患者預后較差，5年生存率低于20%，如今，免疫聯(lián)合化療已經成為晚期ICC的標準治療方案。然而，部分患者由于免疫抑制性腫瘤微環(huán)境（TME）的存在，難以從免疫治療中獲益，臨床中亟需進一步探索ICC中TME的特征，了解其導致免疫檢查點抑制劑療效不佳的機制。近期，一項發(fā)表于

Hepatology

研究背景

TME由多種宿主細胞（如癌細胞、免疫細胞和基質細胞）以及非細胞成分（包括分泌物質和細胞外蛋白）組成。這些因素共同在癌癥的發(fā)生、發(fā)展以及對免疫治療的反應中發(fā)揮重要作用。在TME內部，浸潤腫瘤的免疫細胞至關重要，因為這些細胞會與腫瘤細胞相互作用，導致有利（抗腫瘤）或不利（促腫瘤）的結果。目前，對于ICC的TME研究有限，現(xiàn)有研究主要集中關注特定標記物或細胞類型，如PD-L1表達和CD8 T細胞浸潤。浸潤腫瘤的免疫細胞與腫瘤細胞之間復雜的相互關系尚未被完全闡明，理解這些相互作用對于開發(fā)靶向TME的治療策略至關重要。本次研究中，研究者利用空間轉錄組學來表征ICC中瘤內免疫浸潤的表型，嘗試探索導致免疫抵抗的因素。

研究方法

研究者從中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院國家癌癥中心/腫瘤醫(yī)院的預處理患者中獲取了70個福爾馬林固定石蠟包埋的ICC樣本和8個新鮮的ICC樣本進行分析。

研究結果

• ICC中巨噬細胞+ 型和漿細胞+ 型瘤內免疫浸潤模式

研究者評估了每個樣本的免疫評分，以代表免疫浸潤的平均水平，并研究了4個具有顯著免疫浸潤的樣本中瘤內免疫簇的具體細胞組成，其中有2個樣本（p3和p5）顯示出較高的巨噬細胞標記物CD68表達，在p4和p6中則顯示出漿細胞相關標記物（IGHA1、IGHG1、IGHG3以及多聚IgA和IgM的連接鏈）的高表達。根據這些模式，研究者將樣本分為巨噬細胞+ 型和漿細胞+ 型。

為了驗證浸潤巨噬細胞特征的生物學和預后意義，研究者使用ConsensusClusterPlus包對FU-iCCA隊列進行了共識聚類。聚類確定了患者中的兩個不同亞群，對比簇2（C2），簇1（C1）顯示出浸潤巨噬細胞特征基因的更高表達，C1患者對比C2患者的生存結局更差，顯示了浸潤巨噬細胞特征的預后價。C1還在與增殖（細胞周期和DNA復制）以及促腫瘤特征相關的通路中富集，包括TGFB信號傳導、VEGF信號傳導和細胞外基質重塑的激活，相反，C2則表現(xiàn)出以白細胞遷移和炎癥反應相關通路為標志的強大免疫反應。這些發(fā)現(xiàn)支持了MARCO+ 巨噬細胞的促腫瘤作用。MARCO在巨噬細胞+ 型樣本中高表達，并且MARCO水平高的ICC患者總生存期更短，表明其在臨床結局中具有不利作用。

研究者進一步探索了MARCO在ICC中的表型，通過使用大規(guī)模單細胞數據集（GSE125449、GSE138709、GSE151530、GSE181878和測序的8個ICC樣本）識別出6個主要細胞群：上皮細胞、髓系細胞、成纖維細胞、內皮細胞、T細胞和B細胞，髓系細胞占總細胞群體的7.3%，其中15.8%為MARCO+ TAMs。MARCO在TAM中的分布驗證了其作為典型巨噬細胞標記物的作用。SPP1、RETN和FBP1在MARCO+ TAM中高表達，它們可能促進腫瘤細胞增殖并抑制免疫反應。S100A9和S100A8（Ca2?結合蛋白）也在MARCO+ TAM中上調。

通路分析顯示，MARCO+ TAM中上皮-間質轉化（EMT）活性增強，涉及細胞外基質重塑并促進腫瘤轉移。在MARCO+ TAM中觀察到血管生成和缺氧增強。免疫抑制通路TGFB信號傳導在MARCO+ TAM中也同樣增強，免疫相關通路則在MARCO+ TAM中被抑制。

• MARCO+ TAMs對ICC中的TME具有免疫抑制作用

研究者根據整合的單細胞RNA測序數據集中MARCO+ TAMs中位數量將樣本分為高MARCO+ TAM組和低MARCO+ TAM組，高MARCO+ TAM組顯示出更高比例的惡性細胞和髓系細胞，而T細胞和B細胞較少。在ICC樣本上使用MARCO、CD3和CD8進行多重免疫熒光顯示，MARCO高表達區(qū)域的CD3和CD8表達較少，提示其對T細胞和CD8 T細胞的免疫抑制效應。

研究者整理了與T細胞活性相關的基因，高MARCO+ TAM樣本顯示出更高的記憶T細胞標記物（如SELL和CCR7）表達，以及免疫檢查點PDCD1、CTLA4和TIGIT的表達增加。相反，低MARCO+ TAM樣本顯示出更高的細胞因子（如IFNG）和細胞毒性標記物（如GZMB）表達。

• 探索ICC TME的潛在治療靶點

研究者探索了具有不同瘤內免疫浸潤模式的樣本的腫瘤細胞表型，以探索潛在的腫瘤-免疫相互作用。在大規(guī)模單細胞數據集中提取了腫瘤細胞相對于免疫細胞和正常上皮細胞具有獨特性的標記基因，標準為avg_log2FC>0.25且p值<0.05，結果識別出在巨噬細胞+腫瘤區(qū)域表達最高的CTSE。驗證結果顯示，與鄰近正常區(qū)域相比，CTSE主要在腫瘤細胞中表達，在70名ICC患者中進行的IHC證實了腫瘤細胞中CTSE表達升高，且晚期ICC患者對比早期患者的CTSE水平更高。

研究者檢查了CTSE在三種免疫浸潤類型樣本中的空間表達模式，發(fā)現(xiàn)在巨噬細胞+型樣本（p3和p5）中，CTSE在腫瘤區(qū)域內顯示出顯著表達，該結果在患者隊列中得到驗證，CTSE水平高的患者總生存期更短。同時具有高CTSE和高MARCO水平的患者臨床結局最差，表明這兩種細胞類型之間存在潛在的協(xié)同作用。

研究結果與討論

這項研究對ICC中的瘤內免疫浸潤及其空間排列進行了全面的分析，劃分了巨噬細胞+ 和漿細胞+ 兩個類型，其中MARCO+ TAMs是巨噬細胞+型樣本中的主要細胞類型，并與CTSE+ 腫瘤細胞密切相關。這些發(fā)現(xiàn)可以指導未來的臨床試驗，并為治療策略的開發(fā)提供潛在的生物標志物。

研究中還分析了MARCO+ TAM腫瘤具有侵襲性特征的機制，CTSE作為一種來自肽酶A1家族的天冬氨酸蛋白酶，在腫瘤區(qū)域與MARCO+ TAMs共同大量表達，可以作為潛在的治療靶點。

這項研究存在局限性，例如缺乏接受免疫治療的患者，研究者計劃通過構建具有MARCO表達調控的小鼠模型和使用生成CTSE+ 腫瘤細胞的ICC小鼠細胞系來驗證本次發(fā)現(xiàn)?？傊?，這項研究揭示了ICC中瘤內免疫細胞浸潤模式，并詳盡闡明了MARCO+ TAM和CTSE+ 腫瘤細胞的共定位誘導了免疫抑制性TME。

參考文獻：[1] Fan G, Tao C, Li L, Xie T, Tang L, Han X, Shi Y. The co-location of MARCO+ tumor-associated macrophages and CTSE+ tumor cells determined the poor prognosis in intrahepatic cholangiocarcinoma. Hepatology. 2025 Jul 1;82(1):25-41.

審批編號：CN-174484

有效期至：2026/12/10

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撰寫：Arrival

審校：Arrival

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