條帶很漂亮呀，你怎么還愁眉苦臉的？

師姐你不知道，每當(dāng)電泳一次成功的時候，我就知道苦日子要來了，下次實驗別說漂亮的條帶，可能連內(nèi)參都跑不出來。

那很壞了！

更離譜的是，試劑快用完了，新采購的批次就不一定能做出這個效果了。你也要做重復(fù)吧，怎么一點不著急？

哈哈哈哈，因為我的實驗是預(yù)制的，不僅開盒即用，重復(fù)性還很好!每次省下幾小時操作不香嗎？

說實話，做科研就該把時間花在刀刃上！拒絕在繁瑣耗時，重復(fù)性低的手工配膠上浪費精力！正好賽默飛推出 NovaPAGE Bis-Tris 預(yù)制膠試用活動，輕松復(fù)刻漂亮條帶，節(jié)省更多時間，識別下方二維碼，限量 66 份試用裝馬上搶 >>

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為什么要選 NovaPAGE Bis-Tris 預(yù)制膠？

重復(fù)性好，條帶漂亮：近中性 pH 體系確保條帶清晰銳利，實驗結(jié)果穩(wěn)定可靠。

濃度選擇范圍廣，匹配不同實驗需求：4～12%、8～16%、4～20%、10%、12%

適配伯樂、六一、天能等常見電泳槽，零門檻融入現(xiàn)有工作流程

分離范圍廣：配合 MES 或 MOPS 緩沖液使用，高效分離低至高分子量蛋白

開盒即用，解放雙手，品質(zhì)穩(wěn)定

圖. NovaPAGE? Bis-Tris 凝膠實現(xiàn)理想的重復(fù)性與銳利條帶。

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想次次跑出完美的條帶？這些實操干貨一定要收好！不管是緩沖液選擇、電壓設(shè)置，還是樣品制備、常見問題排查，全是核心實操要點，幫你避開 WB 電泳那些坑，輕松拿捏實驗細(xì)節(jié)～

Q1

MES 與 MOPS 緩沖液如何選擇？

A：取決于目標(biāo)蛋白大小及所需電泳速度。

MES 緩沖液適合低分子量蛋白的分離。其遷移速度快，小蛋白能高效分離，且避免擴散或跑出凝膠。

MOPS 緩沖液適合中高分子量蛋白的分離。其電導(dǎo)率較低，遷移速度慢，能為大蛋白提供更好的分辨率。

Q2

推薦電壓是多少？

A：NovaPAGE 膠推薦在恒壓 200 V 下電泳。若觀察到輕微邊緣效應(yīng)（外側(cè)泳道彎曲），可將電壓降至 150 V 并延長電泳時間（約 35～40 分鐘）。使用 MOPS 緩沖液也有助于減輕邊緣效應(yīng)。

Q3

樣品制備有哪些要點？

A：使用 Bis-Tris 膠時，建議使用與 Bis-Tris 中性 pH 環(huán)境兼容的樣品緩沖液，如 NuPAGE? LDS 上樣緩沖液（4X），并添加合適的還原劑（如 NuPAGE 樣品還原劑（10X））。樣品與上述上樣緩沖液、還原劑混勻后，70 °C 加熱 10 分鐘，以確保蛋白充分變性，同時避免煮沸可能導(dǎo)致的蛋白降解。為了獲得最佳結(jié)果，建議樣品在實驗當(dāng)天進(jìn)行還原處理，避免提前還原后冷凍保存。

Q4

常見問題如何快速排查？

A： 常見問題及解決方案如下：

? 微笑條帶——常見原因是過熱

排查方案：緩沖液新鮮（配制一周內(nèi)使用）且正確配制。建議控制電泳溫度為 20～25 °C，可置于冰浴中電泳以幫助散熱。同時注意電泳液液面不要過低，以幫助散熱。

? 拖尾/條帶彌散/條帶模糊——常見原因是樣品質(zhì)量與上樣量。

排查方案

樣品鹽濃度過高易導(dǎo)致拖尾，需脫鹽或稀釋樣品。

上樣量過大易造成拖尾，建議每孔上樣 10～20 μg 總蛋白。

變性不充分可導(dǎo)致條帶模糊，需確保 70 °C 加熱 10 分鐘。難變性蛋白可延長至 15 分鐘（避免煮沸）。

蛋白降解也會導(dǎo)致拖尾，建議在裂解液中添加蛋白酶抑制劑，并保持樣品低溫。

DNA 污染可能導(dǎo)致垂直條紋和拖尾，可以在樣品制備時加入 DNase 或超聲處理去除核酸污染。

? 泳道或條帶歪斜——常見原因是設(shè)備未正確安裝

排查方案： 確保電泳槽水平放置，卡夾穩(wěn)固地裝入電極。電泳槽傾斜或膠受力不均可能導(dǎo)致條帶跑偏。檢查緩沖液液面是否正確加至刻度線。

Q5

NovaPAGE 膠轉(zhuǎn)膜有特殊注意事項嗎？

轉(zhuǎn)膜緩沖液中高濃度甲醇（例如 20%）可能導(dǎo)致 Bis-Tris 膠收縮，從而引起條帶變形并降低轉(zhuǎn)膜效率。為避免此問題，建議將甲醇濃度控制在 10%～15%。

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賽默飛保留活動最終解釋權(quán)，僅限終端科研用戶參與。

內(nèi)容策劃：鄒禮平

內(nèi)容審核：吳軍

題圖來源：自己做的