免疫檢查點(diǎn)阻斷療法雖已革新癌癥治療，但臨床響應(yīng)率常因腫瘤免疫微環(huán)境中復(fù)雜的免疫抑制網(wǎng)絡(luò)而受限。其中，程序性死亡配體1不僅存在于腫瘤細(xì)胞表面，還在腫瘤相關(guān)髓系細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞）上廣泛表達(dá)，形成一個(gè)跨細(xì)胞類型的免疫抑制通信網(wǎng)絡(luò)。傳統(tǒng)抗體藥物采用化學(xué)計(jì)量模式阻斷PD-L1，僅能實(shí)現(xiàn)瞬時(shí)抑制，且無(wú)法清除整個(gè)蛋白支架，難以瓦解這一頑固網(wǎng)絡(luò)。因此，開(kāi)發(fā)能夠?qū)崿F(xiàn)多細(xì)胞、多輪次、持續(xù)性清除PD-L1的策略，成為突破當(dāng)前免疫療法瓶頸的關(guān)鍵方向。

近日，南京大學(xué)魏嘉團(tuán)隊(duì)與湖南大學(xué)邢航團(tuán)隊(duì)在《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》上發(fā)表了題為《Dynamic reprogramming of the tumor immune network via multicycle checkpoint degradation for cancer immunotherapy》的研究論文。研究團(tuán)隊(duì)設(shè)計(jì)并開(kāi)發(fā)了一種名為RECYC的新型受體介導(dǎo)內(nèi)溶酶體循環(huán)嵌合體，通過(guò)將pH敏感的PD-L1結(jié)合肽與pH穩(wěn)定的CI-M6PR靶向適配體偶聯(lián)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞及髓系細(xì)胞上PD-L1的高效、多輪降解。

研究團(tuán)隊(duì)首先通過(guò)單細(xì)胞測(cè)序分析證實(shí)，在小鼠4T1腫瘤模型及胃癌患者樣本中，PD-L1等免疫檢查點(diǎn)在腫瘤細(xì)胞和髓系細(xì)胞中廣泛表達(dá)，且其水平與患者免疫治療響應(yīng)密切相關(guān)?；诖?，研究團(tuán)隊(duì)設(shè)計(jì)了RECYC。其中，PD-L1結(jié)合肽在生理pH下具有微摩爾級(jí)親和力，但在內(nèi)體酸性環(huán)境中親和力顯著下降（約40%-60%），實(shí)現(xiàn)靶點(diǎn)解離；而CI-M6PR適配體則在高親和力下保持pH穩(wěn)定性，確保受體持續(xù)結(jié)合。共聚焦顯微鏡及流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證了這一“捕獲-釋放”機(jī)制。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，RECYC能介導(dǎo)CI-M6PR依賴的PD-L1內(nèi)化與溶酶體降解。在4T1腫瘤細(xì)胞和RAW264.7髓系細(xì)胞中，RECYC處理18小時(shí)后，PD-L1水平呈劑量和時(shí)間依賴性下降。通過(guò)多輪攝取實(shí)驗(yàn)及使用抑制CI-M6PR循環(huán)的對(duì)照（如單次循環(huán)降解的SS-RECYC或莫能菌素處理），研究證實(shí)RECYC具備多輪降解能力，CI-M6PR-適配體復(fù)合物在酸性內(nèi)體中解離PD-L1后可回收到細(xì)胞膜進(jìn)行下一輪靶向。

在體外共培養(yǎng)體系中，經(jīng)RECYC預(yù)處理的4T1腫瘤細(xì)胞或髓系細(xì)胞（CD11b+）與CD8+ T細(xì)胞共培養(yǎng)后，T細(xì)胞活化標(biāo)志物CD25、CD69及脫顆粒標(biāo)志物CD107a顯著上調(diào)，干擾素-γ分泌及腫瘤殺傷能力亦優(yōu)于PD-L1抗體、非靶向?qū)φ战M及單次循環(huán)降解對(duì)照組。這表明，多細(xì)胞PD-L1清除能有效解除對(duì)T細(xì)胞的抑制，增強(qiáng)其效應(yīng)功能。

在免疫“冷”腫瘤（4T1乳腺癌模型）和免疫“熱”腫瘤（CT26結(jié)腸癌模型）中，RECYC治療均展現(xiàn)出優(yōu)于PD-L1單抗的抑瘤效果。體內(nèi)藥效結(jié)果顯示，RECYC處理組小鼠腫瘤體積和重量顯著低于其他對(duì)照組。在自發(fā)乳腺癌MMTV-PyMT模型中亦觀察到類似趨勢(shì)，進(jìn)一步證實(shí)RECYC在復(fù)雜免疫微環(huán)境中的治療潛力。

在腫瘤免疫微環(huán)境分析中，RECYC顯著降低了腫瘤細(xì)胞及髓系細(xì)胞（包括腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞）上的PD-L1表達(dá)。免疫細(xì)胞 profiling顯示，RECYC不僅增加了腫瘤浸潤(rùn)C(jī)D8+ T細(xì)胞的比例及其活化水平，還重塑了髓系細(xì)胞群體，促進(jìn)M1型巨噬細(xì)胞和N1型中性粒細(xì)胞極化，同時(shí)抑制免疫抑制性M2和N2亞群。相關(guān)性分析進(jìn)一步證實(shí)，PD-L1清除程度與腫瘤體積縮小及免疫活化表型高度相關(guān)。

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