為了防止水產(chǎn)動(dòng)物疫病的發(fā)生，國(guó)內(nèi)外均致力于尋求高效、快速、廣譜的消毒劑。其消毒效果往往受到微生物的種類(lèi)、PH、溫度、濃度、有機(jī)物等因素的影響。

為了解坤源“滅毒威”的消毒效果，本試驗(yàn)選用了舒伯特氣單胞菌(Aeromonas schubertii)、維氏氣單胞菌(Aeromonasveronii)、愛(ài)德華氏菌(Edwardsiellatarda,Et)、嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，為評(píng)價(jià)該消毒劑殺滅效果提供依據(jù)。

1.材料

1.1供試藥劑

坤源“滅毒威”

1.2供試菌株

舒伯特氣單胞菌(Aeromonas schubertii)、維氏氣單胞菌(Aeromonasveronii)、愛(ài)德華氏菌(Edwardsiellatarda,Et)、嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)以上待測(cè)菌株由湖南坤源生物科技有限公司微生物實(shí)驗(yàn)室保存。

1.3儀器

恒溫培養(yǎng)箱、移液槍、潔凈工作臺(tái)、恒溫振蕩器、高壓蒸汽滅菌鍋等

1.4培養(yǎng)基

LB液體培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基

1.5耗材及試劑

96孔板、移液槍槍頭、離心管、無(wú)菌水、無(wú)菌PBS、TTC等。

2. 試驗(yàn)時(shí)間：

2022年11月16日—11月19日

3. 試驗(yàn)地點(diǎn)：

本公司研發(fā)中心微生物室

4. 試驗(yàn)方法

4.1 菌株的活化培養(yǎng)：取出保存的菌株，在LB平板上劃線(xiàn)活化，于28℃的恒溫培養(yǎng)箱中倒置過(guò)夜培養(yǎng)；

4.2 待LB平板上長(zhǎng)出單菌落后，挑取單菌落接種于10mL的LB液體培養(yǎng)基中搖瓶培養(yǎng)，置于28℃下，180rpm/min搖床中培養(yǎng)24h；

4.3 將培養(yǎng)過(guò)夜的菌液按梯度稀釋?zhuān)坎加贚B平板，置于28℃的恒溫培養(yǎng)箱中倒置過(guò)夜培養(yǎng)；

4.4 活菌平板計(jì)數(shù)；

4.5 以舒伯特氣單胞菌、維氏氣單胞菌、愛(ài)德華氏菌、嗜水氣單胞菌四種水產(chǎn)致病菌為受試菌株、利用微量稀釋法測(cè)定坤源“滅毒威”的最小抑菌濃度；

4.6 將坤源“滅毒威”加入每孔載有100微升LB液體培養(yǎng)基96孔板中，采用二倍稀釋法使第1孔至第10孔的濃度為1024ppm到2ppm；

4.7 將8行孔分為4組，由上至下分別為舒伯特氣單胞菌、維氏氣單胞菌、愛(ài)德華氏菌、嗜水氣單胞菌，每種菌兩個(gè)平行，各組1至10孔每孔各自加入100uL濃度1.5*106 CFU/mL的菌液，第11孔加等量藥液和液體培養(yǎng)基不加菌液為空白對(duì)照，第12孔加菌液不加藥液，為陽(yáng)性對(duì)照。

4.8 放入恒溫培養(yǎng)箱28℃培養(yǎng)，將96 孔板在規(guī)定的溫度下培養(yǎng)24h 后，每孔加入 0.25% TTC 5微升，繼續(xù)培養(yǎng)2h，觀(guān)察培養(yǎng)孔，呈現(xiàn)紅色為有細(xì)菌生長(zhǎng)，每個(gè)平行中無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)對(duì)應(yīng)的最低濃度即為最小抑菌濃度(MIC)。

5.結(jié)果

+++代表有菌生長(zhǎng)；---代表無(wú)菌生長(zhǎng)

本試驗(yàn)測(cè)定了不同濃度的坤源“滅毒威”對(duì)舒伯特氣單胞菌、維氏氣單胞菌、愛(ài)德華氏菌、嗜水氣單胞菌這4種病原菌的抑菌效果，試驗(yàn)結(jié)果表明：

（1）坤源“滅毒威”對(duì)舒伯特氣單胞菌最小抑菌濃度（MIC)為8ppm；

（2）坤源“滅毒威”對(duì)維氏氣單胞菌最小抑菌濃度（MIC)為4ppm；

（3）坤源“滅毒威”對(duì)愛(ài)德華氏菌最小抑菌濃度（MIC)為4ppm；

（4）坤源“滅毒威”對(duì)嗜水氣單胞菌最小抑菌濃度（MIC)為8ppm。

備注：1ppm=1mg/L

實(shí)驗(yàn)結(jié)果附圖

6.實(shí)驗(yàn)結(jié)論

本研究測(cè)定了不同濃度的坤源“滅毒威”對(duì)四種常見(jiàn)的水產(chǎn)致病菌（舒伯特氣單胞菌、維氏氣單胞菌、愛(ài)德華氏菌、嗜水氣單胞菌）的最低抑菌濃度，結(jié)果顯示坤源“滅毒威”對(duì)上述四種致病菌均具有優(yōu)異的抑菌效果，適用于廣大養(yǎng)殖戶(hù)在水產(chǎn)養(yǎng)殖過(guò)程中利用消毒劑消毒時(shí)提供參考。

附圖：本公司研發(fā)中心實(shí)驗(yàn)室

研發(fā)中心實(shí)驗(yàn)室

無(wú)菌操作室

微生物無(wú)菌室平面圖

生物安全柜

恒溫振蕩器

恒溫培養(yǎng)箱

微生物實(shí)驗(yàn)員進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作