近期，阮氏Truc Linh及其團隊開展專項科研實驗，系統(tǒng)評估了玫瑰茄葉提取物針對引發(fā)南美白對蝦急性肝胰壞死的副溶血弧菌的抗藥性抑制效果，同時深入探究該提取物對實驗用南美白對蝦生長速率及機體免疫反應(yīng)的調(diào)控作用，為水產(chǎn)養(yǎng)殖中細(xì)菌性病害的綠色防控提供了全新的天然產(chǎn)物參考依據(jù)。

一、研究背景：對蝦急性肝胰壞死病害的危害與防控痛點

急性肝胰壞死（Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease, AHPND），又稱早期蝦死亡綜合征（EMS），是全球南美白對蝦養(yǎng)殖領(lǐng)域危害極為嚴(yán)重的烈性傳染性病害，該病發(fā)病急、傳播快，可導(dǎo)致對蝦在短周期內(nèi)出現(xiàn)大規(guī)模批量死亡，直接造成巨大的養(yǎng)殖經(jīng)濟損失，嚴(yán)重制約對蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

現(xiàn)有研究證實，攜帶PirA、PirB毒力基因編碼質(zhì)粒的副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus，VpAHPND）是誘發(fā)AHPND的主要致病菌（Tran等，2013；世界動物衛(wèi)生組織OIE，2019）。除此之外，哈維弧菌（V. harveyi）、坎貝爾弧菌（V. campbellii）、歐文斯弧菌（V. owensii）及普內(nèi)西斯弧菌（V. punensis）等菌株，因部分?jǐn)y帶與AHPND致病質(zhì)粒序列高度同源的毒素基因，同樣被認(rèn)定為AHPND的重要潛在致病因子（Restrepo等，2018）。更值得警惕的是，Lee等（2022）研究發(fā)現(xiàn)，健康對蝦接觸-80℃低溫保存的AHPND感染病蝦后，依舊存在較高的感染風(fēng)險，這也進一步凸顯了該病害防控的復(fù)雜性與緊迫性。

二、試驗材料：玫瑰茄的資源特性與天然抗菌潛力

在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，天然草本提取物的抗菌活性是當(dāng)前生物防控方向研究最為廣泛的核心內(nèi)容，憑借綠色安全、無殘留、不易誘發(fā)耐藥性等優(yōu)勢，具備極高的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用潛力（Reverter等，2017）。多數(shù)具備抗菌功效的草本提取物中，核心活性成分為生物堿、糖苷類、多酚類及萜烯類化合物，這類天然物質(zhì)是發(fā)揮抑菌殺菌作用的關(guān)鍵（Ahn，2017）。相較于人工合成抗菌劑，天然草藥應(yīng)用具備多重核心優(yōu)勢：原料成本低廉、本土資源易得、制備工藝簡便、可自然生物降解，且全程對養(yǎng)殖水體與周邊環(huán)境無負(fù)面影響，完全契合生態(tài)水產(chǎn)養(yǎng)殖的發(fā)展理念（Syahidah等，2015）。

近年來，學(xué)界陸續(xù)開展多項研究，篩選能夠提升對蝦弧菌抗性、強化機體免疫功能的天然草本提取物，為對蝦綠色養(yǎng)殖病害防控提供了新方向（Ghosh等，2021）。本研究選用的玫瑰茄（Hibiscus sabdariffa），是越南沿海地區(qū)廣泛分布的野生鄉(xiāng)土植物，環(huán)境適應(yīng)性極強，可在淡水、微咸水及咸水周邊土壤中正常生長，資源儲量豐富、取材便捷。

據(jù)Loi（2004）研究記載，玫瑰茄本身具備防腐、利尿及抗氧化等多重生物活性；其葉片中富含戈戈汀、花青素類、黃酮類葡萄糖苷洛伊比斯克里汀、核黃素、抗壞血酸、煙酸、胡蘿卜素、鈣、鐵等多種活性化學(xué)成分，為其抗菌活性提供了物質(zhì)基礎(chǔ)（Lade等，2022）。已有前期研究證實，玫瑰茄提取物對多種革蘭氏陰性菌（創(chuàng)傷弧菌、嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌、大腸桿菌、腸道沙門氏菌、肺炎克雷伯菌、普魯加里氏菌、銅綠假單胞菌）和革蘭氏陽性菌（金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、變異單胞菌、蠟狀芽孢桿菌）均具備顯著的抑菌活性（Abdallah，2016；Abass等，2022；Lade等，2022）。但截至本研究開展前，學(xué)界尚未有針對玫瑰茄提取物在水生生物領(lǐng)域應(yīng)用的系統(tǒng)性研究，尤其缺乏其對養(yǎng)殖對蝦致病性弧菌的抑制效果、促生長作用及免疫增強功效的專項驗證，這也是本研究的核心創(chuàng)新點與研究空白填補方向。

三、實驗設(shè)計與實施流程

（一）玫瑰茄葉提取物制備

研究團隊從越南沿海不同區(qū)域分三批次采集新鮮玫瑰茄葉片作為試驗原料，采用統(tǒng)一流程處理：首先將葉片徹底清洗去除雜質(zhì)與表面污染物，隨后在50℃恒溫條件下烘干脫水，再經(jīng)研磨處理制成細(xì)膩粉末；后續(xù)采用三種不同溶劑分別開展提取試驗，具體分為三組：方法一為甲醇溶劑提取組，方法二為乙醇溶劑提取組，方法三為熱水浸提組，以此對比不同提取方式下提取物的活性差異。

（二）實驗用蝦篩選與養(yǎng)殖管理

本研究選用無特定病原南美白對蝦作為試驗對象，蝦苗處于PL15階段，經(jīng)專業(yè)檢測確認(rèn)白斑綜合征病毒、微孢子蟲及急性肝胰壞死致病菌均為陰性，保證試驗材料的純凈性。試驗用蝦在茶榮大學(xué)農(nóng)漁學(xué)院實驗養(yǎng)殖池塘中標(biāo)準(zhǔn)化培育，直至單尾蝦體重達(dá)到10.54±0.39g、體長達(dá)到11.61±0.23cm，滿足試驗規(guī)格要求。

在轉(zhuǎn)入試驗養(yǎng)殖池前，參照Sirikharin等（2015）的方法，結(jié)合OIE（2009）標(biāo)準(zhǔn)，采用特異性引物PCR法與熱循環(huán)法，再次對所有試驗蝦進行白斑病原體及AHPND致病菌檢測，確認(rèn)全部為陰性后，將對蝦放入試驗池進行3天環(huán)境馴化，使其適應(yīng)池內(nèi)水質(zhì)、養(yǎng)殖密度等環(huán)境條件，馴化結(jié)束后正式開展飼喂試驗。

（三）生長指標(biāo)與免疫指標(biāo)檢測

本研究試驗周期為30天，試驗期間每10天進行一次生長指標(biāo)測定，每次從每個試驗池中隨機捕撈5尾對蝦，精準(zhǔn)測量單尾蝦的體長與體重，系統(tǒng)記錄數(shù)據(jù)并分析玫瑰茄葉提取物添加飼料對南美白對蝦生長性能的影響。同時，研究團隊同步開展多項體外與體內(nèi)試驗，全面評估不同溶劑提取的玫瑰茄葉提取物對副溶血弧菌的耐藥性抑制效果，以及其對南美白對蝦生長性能、機體免疫反應(yīng)的綜合調(diào)控作用。

四、實驗核心結(jié)果與研究結(jié)論

（一）不同提取物對副溶血弧菌的抗菌效果

試驗結(jié)果表明，三種提取方式制備的玫瑰茄葉提取物，對AHPND致病菌副溶血弧菌均表現(xiàn)出顯著的抗菌活性，其中甲醇溶劑提取物的抗菌效果最優(yōu)，平均抑菌圈直徑達(dá)到24.9±0.6mm，抑菌效果近乎是陽性對照組（平均抑菌圈直徑16.2±0.6mm）的1.5倍，該結(jié)果與同類天然提取物抗菌研究結(jié)論完全一致。究其原因，甲醇的極性高于乙醇，極性差異直接影響提取物中活性成分的溶出效率，進而使得甲醇提取組的抑菌圈直徑顯著大于乙醇提取組，熱水提取組抗菌效果介于兩者之間。

進一步藥敏試驗檢測顯示，玫瑰茄葉甲醇提取物針對副溶血弧菌的最小抑菌濃度（MIC）為0.02mg/mL，最小殺菌濃度（MBC）為0.08mg/mL，極低的有效濃度進一步印證了其高效的抗菌殺菌潛力，具備實際養(yǎng)殖應(yīng)用的可行性。

（二）提取物對南美白對蝦生長與免疫的調(diào)控作用

在30天飼喂試驗中，玫瑰茄葉甲醇提取物作為飼料添加劑，在1%和1.5%兩個添加濃度下，均能顯著促進南美白對蝦的生長發(fā)育，試驗組對蝦生長速率明顯優(yōu)于空白對照組。同時，免疫指標(biāo)檢測結(jié)果顯示，添加1%和1.5%玫瑰茄葉甲醇提取物的試驗組，對蝦總血細(xì)胞數(shù)（THC）、顆粒細(xì)胞數(shù)（GC）及顆粒白細(xì)胞數(shù)（HC）均顯著提升，與空白對照組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p < 0.05），證實該提取物可有效激活對蝦機體免疫系統(tǒng)，強化非特異性免疫功能，提升對致病菌的抵抗力。

（三）研究核心結(jié)論

綜合全部試驗結(jié)果可得出，玫瑰茄葉提取物尤其是甲醇提取物，對誘發(fā)對蝦急性肝胰壞死的副溶血弧菌具備高效的抑菌殺菌作用，可作為針對性的天然抗菌劑使用；同時，該提取物作為綠色飼料添加劑，能夠同步實現(xiàn)促進南美白對蝦生長、增強機體免疫功能的雙重功效，是一種極具開發(fā)價值的水產(chǎn)養(yǎng)殖綠色投入品，后續(xù)可進一步優(yōu)化提取工藝與添加劑量，推動其在對蝦生態(tài)養(yǎng)殖中的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。