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制備薄層色譜(Prep TLC)是一種 非常實用的 用于少量樣品純化的技術(shù)。PTLC可以快速分離反應(yīng)體系混合物中的多種組分，因此對于獲得試驗反應(yīng)產(chǎn)物或天然提取物組分的分離尤其有用。 此技術(shù)需要多次實踐才能熟練掌握，新手一定要向?qū)嶒炇依飵熜謳熃愣嗾埥獭?【】

常見制備板尺寸: 20cm × 20cm, SiO2厚度0.25 mm。 難分離樣品載量: 10-25mg；較難分離樣品載量：25-50mg；易 分離樣品 載量: 50- 90mg。 國內(nèi)很多廠家的制備板厚度可以到1mm，板越厚載樣量越大。

制備薄層色譜(PTLC)操作流程：上樣--展開--檢測--刮板--洗脫

樣品要求：因為硅膠板是弱酸性的，對酸不穩(wěn)定的化合物盡量避免爬大板；對空氣，水，有機(jī)溶劑穩(wěn)定； 低沸點的溶劑里要好溶；最好有紫外吸收；極性不能太大（至少展開劑能爬起來）。

上樣：盡量少的溶劑溶解樣品，最好是易揮發(fā)的，二氯甲烷最常用，如果不溶可以加幾滴甲醇促溶?？梢杂靡淮涡缘喂苋藁ê蠹舫擅P狀上樣，每個人的辦法都不同，小編就是這么弄的，順便練練毛筆字。上樣時也最好像寫毛筆字一樣一氣呵成，這樣跑出來的帶比較均勻。如樣品溶液太多需要上兩遍樣，先用吹風(fēng)機(jī)吹干溶劑后再上樣，不穩(wěn)定的樣品千萬不要用熱風(fēng)吹，或者直接用氮氣流吹干。通常情況下， 每塊20X20的大板上樣量：40-60mg; 如果反應(yīng)比較雜的話，可適當(dāng)減少上樣量；上樣的樣品帶距離兩端大約1cm, 距離底邊大約2-3cm，總之控制樣品帶的高度一定要高于展開缸中展開劑的高度。 溶解度差的樣品，要減少上樣量防止拖尾。

展開：展開之前，一定將溶劑吹干或晾干，否則會導(dǎo)致色帶的形狀不規(guī)則。展開劑的選擇，先用小板爬樣，具體怎么爬小板，請回看往期文章（），選到合適的展開劑后，配好溶劑爬大板，由于大板和小板由細(xì)微的差別，大板展開劑的極性可以稍微比小板展開劑的極性大一點，一樣的話也問題不大。跑板溶劑前沿最好要跑到距離頂端1cm左右，充分展開樣品，切記不要跑過，跑過的話，極性小的點可能會被展開劑沖都一起，而極性大的點雖然不會沖到上面，但會變散，不容易判斷色帶的邊緣。

另外，如果上樣的色帶較寬或者不規(guī)則，可以在展開之前提前利用大極性溶劑預(yù)展開2-3cm，將寬色帶壓縮成窄帶，然后拿出來重新吹干，然后再正常展開。

展開時，和爬小板類似，要保持展缸內(nèi)較高的蒸汽壓，最好用重物壓緊展缸蓋。如果展缸有裂紋的話，二氯甲烷甲醇體系千萬不要用，石油醚乙酸乙酯體系可以考慮，總之效果都不好。 一個好的溶劑體系應(yīng)該使混合物中所有的化合物都離開基線，但并不使所有化合物都到達(dá)溶劑前端，Rf值最好在0.2~0.8之間。薄層色譜分析的目標(biāo)產(chǎn)物點Rf最好0.4~0.6之間。那么，應(yīng)該選取哪些溶劑呢？一些標(biāo)準(zhǔn)溶劑和他們的相對極性列于如下：【 】

常用展開體系極性大小順序

石油醚 <正己烷<二氯甲烷<四氫呋喃<乙酸乙酯<丙酮<正丙醇<甲醇<水< pan>

常用的混合體系

EA/PE(hexanes)，DCM/MeOH

PE/DCM，PE/Acetone，Ether/DCM，EA/DCM，Acetone/DCM

展開劑的選擇原則

1、對所需成分有良好的溶解性;

2、可使各成分間有較好的分離；

3、待測組分的Rf在0.2~0.8之間，目標(biāo)產(chǎn)物點Rf最好0.4~0.6之間，；

4、不與待測組分發(fā)生化學(xué)反應(yīng);

5、沸點適中，黏度較小;

6、展開后組分斑點圓且集中;

7、混合溶劑要新鮮配制。

8、如果一次展開后，發(fā)現(xiàn)分離效果不佳，可以考慮吹干后重復(fù)展開。

檢測：產(chǎn)品的判斷，通過極性大致判斷哪幾個色帶可能是產(chǎn)品，然后每個色帶可以先刮一點，碾碎，加溶劑溶解，過濾送LCMS檢測判斷。

能爬大板的樣品一般是有紫外吸收的化合物，這樣可以準(zhǔn)確判斷產(chǎn)物的準(zhǔn)確位置并取得較好的純化效果。沒有紫外吸收的化合物也可以爬大板，但是得到產(chǎn)物的純度全靠運氣了！建議使用微量柱層析純化【】。無紫外吸收的樣品可以參照以下方法盲刮，我們將制備板的一側(cè)進(jìn)行部分顯色，活用玻璃刀將TLC板分割下小部分，通過部分的顯色情況，來反推整塊板的顯色情況，所以相對的對板的展開效果的要求比較高，如果爬的色帶不規(guī)則，那很難得到純的產(chǎn)物。

其實不用切割下來，也可以顯色，利用滴管在板邊緣涂顯色劑，然后顯色，效果也可以。

產(chǎn)物色帶的判斷：如果有標(biāo)樣點的話，可以跟標(biāo)樣點TLC檢測對照；如果沒有標(biāo)樣點的話可以將TLC—LCMS或NMR組合判斷；有時在大板展開后，可能會出現(xiàn)像下方第3塊板的情況，兩條色帶距離特別近，不好判別是不是一個東西，造成這種狀況的原因可能是過載或受潮，建議大家將兩條色帶分別刮取后與標(biāo)點對照來展開判斷是不是一個東西，再確定能不能合并?！尽?/p>

對于一些特殊樣品，如烯烴的Z/E構(gòu)型的分離， 制備薄層色譜可能分離度也不會很高，可以把色帶分為三份，中間是可能混合帶，上下色帶可以得到純度較高的產(chǎn)物?！尽?br/>

刮板：判斷好色帶后，在紫外燈下，用鉛筆描好熒光帶，開始刮板。帶好口罩很重要，小編是用平頭雕刻筆刀刮板的，非常好用。另外非常重要的是，在確定得到所需產(chǎn)物之前，不要輕易丟棄制備板。如果需要純化的樣品是最終產(chǎn)物，可以適當(dāng)?shù)纳釛壣珟н吘墸还慰拷虚g的部分來確保純度，但是產(chǎn)物量如果不夠，可以把舍棄的部分刮下來，進(jìn)行二次爬板純化 。如果是中間體，對純度要求不高，盡量把所有含有目標(biāo)產(chǎn)物的色帶都刮下來確保收率。

洗脫：刮好的硅膠，量少的話，可以隔著稱量紙用試管或大天平砝碼等硬物搟碎。量多的話，直接裝到自封袋里面隨便蹂躪，直到成粉末為止。粉末狀的硅膠樣品的洗脫，大部分人是直接加溶劑泡出來。但小編用的是，把硅膠粉直接裝到柱子（有底層砂芯的那種）里，直接像過柱子一樣在上層加溶劑壓出來，這種方法的好處就是，對于溶解性不好的樣品也可以 用相對較少的溶劑洗 快速洗出產(chǎn)品。加入溶劑洗脫的時候可以隨時點板看產(chǎn)品是否已經(jīng)完全洗出。 盡量選擇溶解度好并且極性小的溶劑，通常可用二氯甲烷或者乙酸乙酯，如果化合物溶解度較差時，也可選用二氯甲烷：甲醇10：1的混合溶劑進(jìn)行洗脫，防止溶解過多硅膠，洗脫劑避免加入過多的甲醇。

總之，制備薄層色譜是對于少量樣品一種非常實用的純化方法，如果洗脫徹底的話，損失非常少，而且可以直接看到產(chǎn)物色帶操作性更強(qiáng)，一般不會像柱層析那樣過丟產(chǎn)物。缺點就是，展開的時間比柱層析更長，對于一些不穩(wěn)定的產(chǎn)物，在這個過程中可能會壞。

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