人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）是一種非常常見的病毒，很多人在嬰幼兒時(shí)期就已經(jīng)感染，但它通常不會引起明顯癥狀，而是悄悄“潛伏”在體內(nèi)，一旦人體免疫力下降，就有可能“激活”，引發(fā)健康問題。近年來，科學(xué)家們注意到，新冠病毒（SARS-CoV-2）感染后，有些患者體內(nèi)的HCMV會被重新激活，但背后的原因一直不清楚。

　　2025年7月16日，暨南大學(xué)陳俊，聯(lián)合江漢大學(xué)萬品和武漢輕工大學(xué)曾馳共同通訊在PlosPathogens在線發(fā)表題為“SARS-CoV-2 encoded ORF3a interacts with YY1 to promote latent HCMV reactivation”的研究型論文，該研究發(fā)現(xiàn)SARS-CoV-2的ORF3a蛋白可以通過與MIEP抑制因子YY1相互作用，激活HCMV的MIEP。這種相互作用導(dǎo)致YY1發(fā)生依賴泛素的降解，進(jìn)而促進(jìn)潛伏HCMV的再激活以及病毒的復(fù)制和增殖。這些發(fā)現(xiàn)揭示了SARS-CoV-2與HCMV在共感染過程中相互作用的分子機(jī)制，為未來預(yù)防和治療這兩種病毒共感染提供了新的理論基礎(chǔ)。

　　促進(jìn)MIEP激活的SARS-CoV-2蛋白的篩選

　　為探究SARS-CoV-2誘導(dǎo)HCMV再激活的機(jī)制，研究者利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)對SARS-CoV-2編碼蛋白進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)ORF3a、ORF7b和M蛋白均可顯著增強(qiáng)HCMV主要即刻早期啟動子（MIEP）的轉(zhuǎn)錄活性。

　　圖1.促進(jìn)MIEP激活的SARS-CoV-2蛋白的篩選

　　進(jìn)一步的劑量依賴實(shí)驗(yàn)顯示，三種蛋白對MIEP活性的促進(jìn)作用與表達(dá)量呈正相關(guān)。結(jié)果表明，這些SARS-CoV-2蛋白可能在病毒共感染中誘導(dǎo)HCMV潛伏病毒的再激活。

　　SARS-CoV-2 ORF3a與YY1相互作用

　　通過篩選發(fā)現(xiàn)，SARS-CoV-2的ORF3a、ORF7b和M蛋白均可激活HCMV MIEP。為進(jìn)一步探究其機(jī)制，作者重點(diǎn)檢測了這些蛋白與已知調(diào)控MIEP的轉(zhuǎn)錄因子（如YY1、NF-κB、AP-1）間的相互作用。免疫共沉淀（Co-IP）實(shí)驗(yàn)顯示，ORF3a能與轉(zhuǎn)錄抑制因子YY1形成復(fù)合物，而ORF7b和M蛋白未檢測到直接結(jié)合。免疫熒光共定位實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)，ORF3a與YY1在細(xì)胞內(nèi)共定位，且ORF3a促使YY1從核內(nèi)轉(zhuǎn)移至胞漿。雙向Co-IP驗(yàn)證了ORF3a與YY1的互作關(guān)系，該互作同樣在SARS-CoV-2感染的THP-1衍生巨噬細(xì)胞中得到確認(rèn)。

　　圖2.SARS-CoV-2的ORF3a與YY1相互作用

　　結(jié)構(gòu)域功能分析表明，ORF3a與YY1的相互作用依賴于YY1的轉(zhuǎn)錄激活域（1-154氨基酸）和鋅指DNA結(jié)合域（296-414氨基酸）。綜上，ORF3a通過結(jié)合YY1影響其細(xì)胞定位和功能，可能是調(diào)控HCMV MIEP活性及潛伏病毒再激活的關(guān)鍵機(jī)制之一。

　　ORF3a恢復(fù)了YY1抑制的MIEP活性

　　作者首先驗(yàn)證了YY1對HCMV MIEP的抑制作用：隨著Flag-YY1表達(dá)量增加，MIEP活性逐漸降低。進(jìn)一步探究ORF3a的作用時(shí)，發(fā)現(xiàn)隨著ORF3a表達(dá)量增加，YY1對MIEP的抑制作用逐漸減弱，同時(shí)免疫印跡顯示YY1蛋白水平下降。使用缺失YY1結(jié)合位點(diǎn)的MIEP突變質(zhì)粒（pGL3-MIEPmut）時(shí)，ORF3a對MIEP活性的調(diào)控喪失，提示ORF3a對MIEP的激活依賴于YY1及其結(jié)合位點(diǎn)。

　　圖3.ORF3a可恢復(fù)YY1對MIEP活性的抑制作用，并呈劑量依賴性

　　此外，敲低YY1表達(dá)可促進(jìn)MIEP活性，但此時(shí)ORF3a的促進(jìn)作用消失，進(jìn)一步說明ORF3a依賴YY1介導(dǎo)MIEP調(diào)控。競爭性表達(dá)缺失轉(zhuǎn)錄抑制結(jié)構(gòu)域的YY1Δ2突變體能結(jié)合ORF3a但無法抑制MIEP活性，且恢復(fù)野生型YY1后抑制作用得以重建，證明ORF3a通過與YY1相互作用解除其對MIEP的抑制。綜上，ORF3a通過與YY1結(jié)合并降低其抑制活性，促進(jìn)HCMV MIEP的激活，可能驅(qū)動潛伏病毒的再激活。

　　ORF3a促進(jìn)YY1的泛素依賴性蛋白酶體降解

　　確認(rèn)SARS-CoV-2 ORF3a與YY1在宿主細(xì)胞中相互作用后，作者進(jìn)一步探討了ORF3a對YY1的影響。隨著ORF3a表達(dá)量增加，293T細(xì)胞中YY1蛋白水平逐漸降低；在感染SARS-CoV-2的巨噬細(xì)胞中亦觀察到Y(jié)Y1顯著下降，敲低ORF3a后YY1表達(dá)恢復(fù)正常，提示ORF3a促進(jìn)YY1降解。

　　圖4.SARS-CoV-2的ORF3a促進(jìn)YY1的泛素化降解

　　免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)合泛素標(biāo)記顯示，ORF3a顯著促進(jìn)了YY1的泛素化修飾。使用蛋白酶體抑制劑MG132能夠阻斷ORF3a介導(dǎo)的YY1降解，而溶酶體抑制劑NH4Cl無效，表明該降解依賴蛋白酶體途徑。

　　進(jìn)一步敲低E3泛素連接酶TRIM59或TRAF3發(fā)現(xiàn)，只有TRIM59缺失阻斷了ORF3a誘導(dǎo)的YY1降解。在SARS-CoV-2感染的巨噬細(xì)胞中，TRIM59敲低也恢復(fù)了YY1蛋白水平。綜上，ORF3a通過與E3連接酶TRIM59相互作用，促進(jìn)YY1的泛素依賴性蛋白酶體降解。

　　SARS-CoV-2 ORF3a促進(jìn)HCMV從潛伏期重新激活

　　除此之外，研究利用THP-1細(xì)胞建立HCMV潛伏模型，結(jié)合ORF3a的穩(wěn)定表達(dá)，發(fā)現(xiàn)ORF3a促進(jìn)了HCMV主要即刻早期基因（IE1/IE2）的表達(dá)，加快了病毒從潛伏期向活躍復(fù)制的轉(zhuǎn)變。RT-qPCR和Western blot結(jié)果均顯示，ORF3a表達(dá)使IE1/IE2轉(zhuǎn)錄及蛋白水平在TPA誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞分化過程中顯著升高，同時(shí)YY1蛋白水平明顯下降，但其mRNA水平無顯著變化，提示ORF3a通過促進(jìn)YY1蛋白降解激活MIEP。

　　圖5.SARS-CoV-2的ORF3a促進(jìn)HCMV從潛伏期再激活

　　在SARS-CoV-2與HCMV共感染模型中，敲低ORF3a可恢復(fù)YY1蛋白表達(dá)，抑制HCMV再激活和復(fù)制，且ΔORF3a突變的SARS-CoV-2病毒增強(qiáng)HCMV IE1/IE2表達(dá)及復(fù)制能力明顯減弱。以上結(jié)果表明，SARS-CoV-2 ORF3a通過介導(dǎo)YY1降解，解除其對HCMV MIEP的抑制，從而促進(jìn)潛伏HCMV的再激活和病毒復(fù)制。

　　綜上所述，本研究首次揭示了SARS-CoV-2蛋白ORF3a通過與轉(zhuǎn)錄抑制因子YY1相互作用，促進(jìn)其泛素依賴性降解，從而激活HCMV主要即刻早期啟動子（MIEP），促進(jìn)潛伏HCMV的再激活。該機(jī)制為SARS-CoV-2與HCMV共感染過程中病毒相互作用提供了分子基礎(chǔ)，強(qiáng)調(diào)了ORF3a作為潛在治療靶點(diǎn)的重要性。未來研究需建立更具生理相關(guān)性的模型，深入探索SARS-CoV-2共感染引發(fā)HCMV再激活的多因素調(diào)控機(jī)制，并評估其在COVID-19長期并發(fā)癥中的作用，為臨床干預(yù)提供新思路。

　　原文鏈接：https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1013344