腫瘤發(fā)生過(guò)程中，腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）分泌并重塑細(xì)胞外基質(zhì)（ECM），導(dǎo)致腫瘤組織顯著硬化。ECM硬度不僅改變腫瘤力學(xué)特性，還影響免疫細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境（TME）中的分布和功能。研究顯示，降低ECM硬度可促進(jìn) T 細(xì)胞遷移并增強(qiáng)免疫檢查點(diǎn)抑制（ICB）療效。機(jī)械敏感離子通道（如Piezo1/2）和黏附分子（如整合素）能感知并轉(zhuǎn)導(dǎo)外界力學(xué)信號(hào)。然而，ECM硬度如何調(diào)控腫瘤特異性CD8? T 細(xì)胞功能仍不清楚。

2024年6月，廈門大學(xué)研究組研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)錄因子Osr2 在經(jīng)歷機(jī)械應(yīng)力的CD8? T 細(xì)胞中顯著誘導(dǎo)，且Osr2足以驅(qū)動(dòng)并維持 T 細(xì)胞衰竭表型。Osr2被確立為力學(xué)應(yīng)答轉(zhuǎn)錄因子，其信號(hào)通路可能成為改善實(shí)體瘤 T 細(xì)胞治療的新靶點(diǎn)。

研究證實(shí)，實(shí)體瘤致密膠原區(qū)因基質(zhì)剛度升高導(dǎo)致CD8? T 細(xì)胞高表達(dá)PD-1和TIM-3，呈現(xiàn)耗竭表型。體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)，高剛度聚二甲基硅氧烷（PDMS）凝膠基質(zhì)通過(guò)機(jī)械應(yīng)力顯著加劇 T 細(xì)胞功能衰竭。

CD8? T 細(xì)胞通過(guò)機(jī)械感受通道Piezo1感知基質(zhì)剛度并介導(dǎo)Ca2?內(nèi)流。Piezo1激活抑制 T 細(xì)胞增殖和效應(yīng)功能，促進(jìn)衰竭；而Piezo1缺失增強(qiáng)CD8? T 細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒性，減少PD-1?LAG-3?等耗竭表型，改善抗腫瘤免疫功能。

為探究機(jī)械應(yīng)力刺激（MFS）促進(jìn)CD8+ T 細(xì)胞耗竭的下游調(diào)控因子，研究通過(guò)多種實(shí)驗(yàn)手段揭示機(jī)械應(yīng)力經(jīng)Piezo1調(diào)控Osr2表達(dá)的機(jī)制。主要包括：① ATAC-seq 分析Yoda1處理后CD8? T 細(xì)胞的染色質(zhì)可及性變化，發(fā)現(xiàn)Osr2等基因位點(diǎn)開(kāi)放增加；② RNA-seq/qPCR 驗(yàn)證Osr2 mRNA上調(diào)；③ 染色質(zhì)變異性（chromVAR）與基序富集分析預(yù)測(cè)CREB1等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合增強(qiáng)；④ 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證明CREB1激活Osr2啟動(dòng)子；⑤ Ca2?成像、CaMKII抑制與Piezo1敲除實(shí)驗(yàn)證實(shí)Piezo1–Ca2?–CaMKII–CREB通路在調(diào)控Osr2轉(zhuǎn)錄中的關(guān)鍵作用。

為了探究Osr2是否參與MFS介導(dǎo)的 T 細(xì)胞耗竭，通過(guò)構(gòu)建 T 細(xì)胞特異性O(shè)sr2敲除小鼠，結(jié)合體外硬基質(zhì)培養(yǎng)、腫瘤共轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn)，Osr2缺失顯著增強(qiáng)腫瘤浸潤(rùn)C(jī)D8? T 細(xì)胞效應(yīng)基因（Prf1、Ifng、Gzmb）表達(dá)，降低耗竭相關(guān)基因（Pdcd1、Tox）水平，增強(qiáng)增殖、減少凋亡，減弱機(jī)械應(yīng)力誘導(dǎo)的 T 細(xì)胞耗竭，表明Osr2是MFS介導(dǎo) T 細(xì)胞耗竭的關(guān)鍵下游執(zhí)行因子。

單細(xì)胞RNA測(cè)序顯示，Osr2特異性富集于腫瘤浸潤(rùn)耗竭CD8? T 細(xì)胞（PD-1?TIM-3?），并與抑制性受體正相關(guān)、與細(xì)胞毒分子負(fù)相關(guān)，提示Osr2在耗竭 T 細(xì)胞中發(fā)揮關(guān)鍵作用。單細(xì)胞分析顯示，Osr2特異富集于腫瘤高纖維化環(huán)境中的晚期或終末耗竭CD8? T 細(xì)胞，而在慢性病毒感染誘導(dǎo)的T_EX細(xì)胞中未表達(dá)，表明Osr2的誘導(dǎo)依賴腫瘤微環(huán)境機(jī)械應(yīng)力。

為了探究Osr2是否能驅(qū)動(dòng) T 細(xì)胞耗竭并削弱抗腫瘤或抗病毒免疫，體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示，Osr2過(guò)表達(dá)抑制CD8? T 細(xì)胞效應(yīng)功能基因表達(dá)（IFNγ?TNFα?、Prf1、Gzmb），誘導(dǎo)耗竭基因（Tox、Tnfsf10），在病毒感染和腫瘤模型中增強(qiáng)耗竭型 T 細(xì)胞的比例，削弱抗腫瘤免疫，顯示Osr2強(qiáng)化 T 細(xì)胞耗竭程序。

為了探究Osr2在CD8? T 細(xì)胞耗竭中的作用及其分子機(jī)制，通過(guò)體外逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒介導(dǎo)Osr2過(guò)表達(dá)（OE）、CD8? T細(xì)胞RNA測(cè)序（RNA-seq）、共免疫沉淀（coIP）、定量染色質(zhì)免疫沉淀（qChIP）、Cut&Tag分析以及小鼠MC38-OVA腫瘤移植模型體內(nèi)功能檢測(cè)，結(jié)果顯示Osr2通過(guò)招募HDAC3形成復(fù)合物，降低H3K27ac水平，抑制IFNγ、TNFα和Prf1等細(xì)胞毒性基因表達(dá)，同時(shí)誘導(dǎo)Tox等耗竭基因表達(dá)，強(qiáng)化CD8? T 細(xì)胞耗竭并削弱效應(yīng)功能，HDAC3抑制可部分逆轉(zhuǎn)該效應(yīng)。

為評(píng)估Osr2在腫瘤微環(huán)境中對(duì)CD8? T 細(xì)胞抗腫瘤功能的調(diào)控作用，研究通過(guò)B16-OVA、MC38-OVA移植小鼠模型和CAR-T細(xì)胞治療實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Osr2缺失顯著增強(qiáng)OT-I及CAR-T 細(xì)胞的抗腫瘤活性，增加IFNγ?TNFα?效應(yīng) T 細(xì)胞比例、降低T_EX細(xì)胞耗竭特征，并提高細(xì)胞增殖、減少凋亡，從而改善實(shí)體瘤免疫療效。

本研究揭示腫瘤硬微環(huán)境通過(guò)機(jī)械應(yīng)力誘導(dǎo)CD8? T 細(xì)胞耗竭，Osr2由Piezo1/鈣/CREB軸和機(jī)械力共同誘導(dǎo)，作為轉(zhuǎn)錄和表觀遺傳因子選擇性增強(qiáng)T_EX細(xì)胞耗竭，抑制細(xì)胞毒性基因表達(dá)并影響CAR-T療效。然而，研究仍有局限：腫瘤細(xì)胞硬度是否也調(diào)控 T 細(xì)胞耗竭尚不明確，組織消化方法可能未完全反映 T 細(xì)胞組成，慢性病毒感染中Osr2不表達(dá)，提示其耗竭機(jī)制可能非普遍性。