足底熱刺痛實(shí)驗(yàn)（Plantar Test / Hargreaves Test）是一種廣泛用于評(píng)估嚙齒類動(dòng)物熱痛敏感性的行為學(xué)方法，特別適用于檢測(cè)外周炎癥性或神經(jīng)病理性疼痛模型中的痛覺過敏以及鎮(zhèn)痛藥物的療效。

Fig1 相關(guān)測(cè)試設(shè)備，上海欣軟

實(shí)驗(yàn)原理

利用聚焦的紅外熱輻射照射小鼠或大鼠后足底皮膚，引發(fā)傷害性熱刺激。動(dòng)物因感受到灼痛而迅速抬腳或舔爪，該縮足潛伏期（Paw Withdrawal Latency, PWL）被自動(dòng)記錄。

潛伏期越短 → 熱痛敏感性越高（痛覺過敏）；

潛伏期延長 → 鎮(zhèn)痛效應(yīng)或感覺減退。

實(shí)驗(yàn)步驟

適應(yīng)階段

將動(dòng)物置于透明有機(jī)玻璃籠中（底部為玻璃板），置于22–25℃安靜環(huán)境中，使其適應(yīng)測(cè)試環(huán)境，減少應(yīng)激干擾。實(shí)驗(yàn)應(yīng)在安靜、無干擾的環(huán)境中進(jìn)行，以避免噪音或震動(dòng)引起動(dòng)物焦慮或僵直，從而影響結(jié)果。所用設(shè)備包括控制器（用于調(diào)節(jié)紅外強(qiáng)度、顯示反應(yīng)時(shí)間）、發(fā)射/檢測(cè)單元（通過光纖連接控制器，發(fā)射紅外光并檢測(cè)足部運(yùn)動(dòng)）、帶框玻璃板（需保持清潔，任何尿液、糞便或污漬都必須立即清除，因其會(huì)影響熱傳導(dǎo)性能）以及適用于大鼠（最多6只）或小鼠（最多12只）的動(dòng)物測(cè)試箱。

實(shí)驗(yàn)前，動(dòng)物需進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練：在實(shí)驗(yàn)開始前至少一周內(nèi)，每天將動(dòng)物輕柔轉(zhuǎn)移至測(cè)試箱中靜置30–60分鐘，使其熟悉環(huán)境并采集基線數(shù)據(jù)；在此期間可放置少量蔗糖或食物顆粒（約5–10粒）以幫助動(dòng)物鎮(zhèn)靜。不同品系活動(dòng)水平差異顯著：大鼠中，Lewis品系較溫順但易睡著導(dǎo)致反應(yīng)延遲，Lister-Hooded品系過于活躍可能干擾測(cè)試，而Sprague Dawley品系活動(dòng)適中，是理想選擇；小鼠中C57BL/6比BALB/c更活躍，但只要充分適應(yīng)，任何品系均可使用。正式測(cè)試時(shí)，先將動(dòng)物轉(zhuǎn)移至測(cè)試箱中適應(yīng)15–20分鐘直至安靜（若睡著可輕敲箱體喚醒），然后根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)設(shè)定合適的紅外強(qiáng)度（如成年雄性Lewis大鼠常用48單位），將發(fā)射/檢測(cè)單元精準(zhǔn)對(duì)準(zhǔn)待測(cè)足底中心正下方（利用容器上的定位線輔助，并確保足底平整貼合玻璃板，否則結(jié)果無效）。按下START鍵后，紅外燈與計(jì)時(shí)器同步啟動(dòng)；當(dāng)動(dòng)物因熱痛縮回足部時(shí)，系統(tǒng)自動(dòng)關(guān)閉紅外燈并停止計(jì)時(shí)。有效反應(yīng)通常伴隨舔舐或查看足部，而自主移動(dòng)不視為有效反應(yīng)，該次數(shù)據(jù)應(yīng)剔除。反應(yīng)時(shí)間需記錄，且建議設(shè)置最大截止時(shí)間為20秒以防止?fàn)C傷。每只足至少重復(fù)測(cè)試3次（若時(shí)間允許建議5次，可剔除最高和最低值后取平均），每次間隔不少于5分鐘（期間可測(cè)試其他動(dòng)物）。

測(cè)試結(jié)束后輕柔將動(dòng)物送回飼養(yǎng)室，并徹底清潔測(cè)試箱和玻璃板（使用70%乙醇等消毒液去除氣味、尿液或糞便）。如需多時(shí)間點(diǎn)采樣，可在后續(xù)時(shí)間點(diǎn)重復(fù)上述步驟。

關(guān)鍵注意事項(xiàng)

避免燙傷：必須設(shè)置安全截止時(shí)間（通常15–20秒）；

控制環(huán)境溫度：室溫波動(dòng)會(huì)影響結(jié)果；

盲法操作：實(shí)驗(yàn)者不知分組信息，減少主觀偏差；

左右足交替測(cè)試：防止局部敏化影響；

剔除異常值：如動(dòng)物在無刺激時(shí)頻繁甩腳，可能提示自發(fā)痛或焦慮。

總結(jié)

該方法具有非侵入性、高靈敏度和良好重復(fù)性，廣泛應(yīng)用于炎癥性或神經(jīng)病理性疼痛模型中的痛覺過敏評(píng)估及鎮(zhèn)痛藥物療效驗(yàn)證。

實(shí)驗(yàn)過程中，操作者必須密切觀察動(dòng)物，確保其縮回足部的行為是對(duì)熱刺激的反應(yīng)，而非自主移動(dòng)。若動(dòng)物因隨意活動(dòng)而抬腳，則該次試驗(yàn)應(yīng)視為無效，因?yàn)樗^察到的“縮足反應(yīng)”很可能并非由熱痛引起。需要注意的是，Hargreaves 設(shè)備本身無法區(qū)分足部運(yùn)動(dòng)是由熱刺激引發(fā)還是出于自主行為。典型的熱痛誘發(fā)縮足反應(yīng)通常會(huì)伴隨動(dòng)物查看或舔舐受刺激的足部。

接受 Hargreaves 測(cè)試的動(dòng)物可能因?qū)嶒?yàn)處理（如注射致痛敏物質(zhì)）而對(duì)熱痛高度敏感，也可能因先前接受過外周或中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷而痛覺減退。對(duì)于痛覺減退的動(dòng)物，必須設(shè)定一個(gè)安全截止時(shí)間以防止因未能及時(shí)縮足而導(dǎo)致燙傷。

文獻(xiàn)引用：

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