水痘-帶狀皰疹病毒（Varicella-Zoster Virus, VZV）是一種人類(lèi)皰疹病毒，初次感染引起水痘，病毒潛伏后可再激活引發(fā)帶狀皰疹（Herpes Zoster, HZ）。為預(yù)防HZ，目前有兩種疫苗：減毒活疫苗Zostavax?和重組亞單位疫苗Shingrix?。盡管Zostavax?為活疫苗，理論上應(yīng)誘導(dǎo)更強(qiáng)的免疫反應(yīng)，但臨床數(shù)據(jù)顯示，Shingrix?在保護(hù)效力上顯著優(yōu)于Zostavax?，尤其在老年人群體中表現(xiàn)更為穩(wěn)定。Shingrix?的主要抗原為VZV的糖蛋白E（glycoprotein E, gE），其表達(dá)系統(tǒng)為中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（CHO-K1），而Zostavax?則在人胚肺成纖維細(xì)胞中生產(chǎn)。

瑞典哥德堡大學(xué)薩赫格倫斯卡學(xué)院Rickard Nordén博士領(lǐng)銜的研究團(tuán)隊(duì)首次解析了重組帶狀皰疹疫苗Shingrix?關(guān)鍵抗原——水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）糖蛋白E（gE）的完整糖基化圖譜，并發(fā)現(xiàn)其“低糖”特征正是該疫苗高效力的秘密之一。相關(guān)成果已發(fā)表于最新一期Int. J. Mol. Sci.（國(guó)際分子科學(xué)雜志）。由于糖基化是病毒蛋白的重要翻譯后修飾，可能影響其免疫原性，作者推測(cè)兩種疫苗中g(shù)E的糖基化差異可能是其免疫效力差異的關(guān)鍵因素之一。

主要結(jié)果

本研究系統(tǒng)分析了在CHO細(xì)胞中表達(dá)的重組gE（gEHP）的糖基化特征，并探討了O-連接糖基化對(duì)B細(xì)胞表位識(shí)別的影響。主要發(fā)現(xiàn)如下：

1. 糖基化位點(diǎn)與結(jié)構(gòu)差異：通過(guò)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS/MS）技術(shù)，研究發(fā)現(xiàn)gEHP在CHO細(xì)胞中表達(dá)的O-連接糖基化程度顯著低于在人成纖維細(xì)胞中表達(dá)的gE（gEL）。gEHP的O-連接糖基化主要集中在三個(gè)區(qū)域（GC-I、GC-II、GC-III），糖鏈結(jié)構(gòu)以核心1型（Galβ3GalNAcα1-O-）為主，且多為單或雙唾液酸化形式。此外，gEHP中還存在少量非人源唾液酸（NeuGc）和O-乙?；僖核幔∟euAc(Ac)）。

2. 糖基化對(duì)抗體識(shí)別的影響：通過(guò)酶解去除糖鏈并進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)去除N-連接和O-連接糖鏈后，gEHP與VZV陽(yáng)性人血清的反應(yīng)性分別下降約8%，兩者聯(lián)合去除則下降17%，提示糖基化在一定程度上增強(qiáng)了gE的抗原性。

3. 糖基化對(duì)B細(xì)胞表位的調(diào)控作用：利用合成肽段和糖肽微陣列技術(shù)，研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)O-連接糖基化對(duì)gE的B細(xì)胞表位識(shí)別具有雙向調(diào)控作用。一方面，在某些區(qū)域（如GC-I），糖基化抑制了抗體結(jié)合；另一方面，在MLD區(qū)域（如GC-III），特定糖基化位點(diǎn)的存在反而增強(qiáng)了抗體識(shí)別。這種調(diào)控作用在不同個(gè)體血清中表現(xiàn)出一致性，提示糖基化可塑造個(gè)體間不同的免疫識(shí)別譜。

4. 疫苗效力差異的潛在機(jī)制：作者提出，Shingrix?中g(shù)E的糖基化程度較低，可能使其B細(xì)胞表位更充分暴露，從而誘導(dǎo)更強(qiáng)的抗體反應(yīng)。而Zostavax?中g(shù)E糖基化更密集，可能遮蔽了部分關(guān)鍵表位，限制了免疫反應(yīng)的廣度。此外，CHO細(xì)胞表達(dá)的gE存在糖基化異質(zhì)性，可能使其具備更廣的抗原覆蓋能力，適應(yīng)不同個(gè)體的免疫識(shí)別特征。

Figure 2. Schematic drawing of varicella zoster virus (VZV) gE, gEL, and gEHP with an outline of the glycan compositions and positions on the peptide sequence of gEHP as determined by mass spectrometry in the present study. Three O-linked glycan epitope clusters (GC) of sialylated core 1 O-linked glycans and one complex type N-linked glycan were found. Two O-linked glycans were situated within the linear B cell epitope (green) [29] while the largest cluster of O-linked glycans was found in the mucin-like domain (MLD) (yellow) close to the transmembrane domain (purple). For gEHP, neither the IDE domain (red) nor the gI-binding domain (blue) contained any glycans, while O-linked glycans were found in the corresponding domains of gEL

研究意義

本研究首次系統(tǒng)揭示了重組gE在CHO細(xì)胞中的糖基化特征，并明確了O-連接糖基化對(duì)VZV gE B細(xì)胞表位識(shí)別的調(diào)控作用。研究結(jié)果為解釋Shingrix?優(yōu)于Zostavax?的免疫效力提供了分子層面的解釋?zhuān)瑥?qiáng)調(diào)了糖基化在疫苗設(shè)計(jì)中的關(guān)鍵作用。尤其值得注意的是，O-連接糖基化不僅影響抗原的物理可及性，還可能通過(guò)形成“糖肽表位”直接參與抗體識(shí)別，這為疫苗抗原的優(yōu)化提供了新的思路。

此外，該研究還提示，在開(kāi)發(fā)針對(duì)其他包膜病毒（如埃博拉病毒、寨卡病毒等）的亞單位疫苗時(shí)，合理設(shè)計(jì)和控制糖基化模式可能成為提升疫苗效力的重要策略。未來(lái)研究可進(jìn)一步探討不同表達(dá)系統(tǒng)對(duì)糖基化模式的調(diào)控機(jī)制，并在動(dòng)物模型中驗(yàn)證糖基化改造對(duì)疫苗保護(hù)效果的影響。

綜上所述，本研究不僅深化了我們對(duì)VZV疫苗免疫機(jī)制的理解，也為基于糖基化調(diào)控的疫苗設(shè)計(jì)提供了理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)支持，具有廣泛的疫苗學(xué)意義。