在腫瘤與自免免疫治療領(lǐng)域，T細(xì)胞銜接器（TCE）是近年來最受關(guān)注的“精準(zhǔn)免疫調(diào)控利器”之一, 它能像 “橋梁”一樣，一端結(jié)合疾病相關(guān)細(xì)胞表面抗原，另一端連接T細(xì)胞表面的CD3分子，實(shí)現(xiàn)活化T細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的精準(zhǔn)殺傷。而CD3抗體，正是這座 “橋梁” 中決定T細(xì)胞激活效率、安全性與臨床轉(zhuǎn)化潛力的核心部件。

作為核心元件的CD3抗體也是TCE類藥物研發(fā)路上的痛點(diǎn)：許多CD3抗體僅能識(shí)別人源CD3亞基，而不與猴源CD3結(jié)合，導(dǎo)致無法在非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物（如食蟹猴）模型中開展更加充分的安全性和有效性驗(yàn)證，為未來的臨床開發(fā)帶來許多不確定性風(fēng)險(xiǎn)；部分抗體雖有交叉活性，卻存在T細(xì)胞過度激活、成藥性差，構(gòu)建成TCE多抗以后輕鏈錯(cuò)配等問題，也會(huì)影響產(chǎn)品的競(jìng)爭(zhēng)力。

菲鵬制藥團(tuán)隊(duì)最新篩選獲得的高人猴交叉反應(yīng)活性的CD3納米抗體——具備良好的功能活性和成藥性，并且非常便于進(jìn)行多抗設(shè)計(jì)篩選，為TCE或相關(guān)產(chǎn)品研發(fā)提供了更好的解決方案。

▌人猴交叉反應(yīng)屬性：TCE安全性評(píng)估的核心要素

評(píng)價(jià) CD3 納米抗體的臨床轉(zhuǎn)化價(jià)值，“人猴交叉活性” 是一道關(guān)鍵門檻——具有能同時(shí)識(shí)別人和食蟹猴的CD3抗體，可以在食蟹猴模型中開展臨床前安全性評(píng)估，而對(duì)于B細(xì)胞異常相關(guān)的疾病，則可以進(jìn)一步在猴子體內(nèi)同步進(jìn)行藥物的有效性驗(yàn)證，這些數(shù)據(jù)將為后續(xù)人體臨床試驗(yàn)的研發(fā)及商業(yè)化決策提供極大的參考價(jià)值。

菲鵬制藥研究人員通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了內(nèi)部研發(fā)的這款CD3納米抗體（FAPON VHH）與人外周血單個(gè)核細(xì)胞（Hu-PBMCs）、食蟹猴外周血單個(gè)核細(xì)胞（Cyno-PBMCs）、人的T細(xì)胞以及Jurkat細(xì)胞系的結(jié)合能力。結(jié)果顯示：與經(jīng)典的人猴種屬交叉抗體克隆SP34相似，FAPON VHH和這些細(xì)胞均有結(jié)合活性，并展示出良好的人猴交叉反應(yīng)活性。

圖1. CD3抗體與不同細(xì)胞的結(jié)合活性

▌交聯(lián)/靶向介導(dǎo)T細(xì)胞激活屬性：TCE安全性的關(guān)鍵支撐

T細(xì)胞激活功能也是衡量一個(gè)CD3抗體的重要指標(biāo)。通過兩種不同的體外T細(xì)胞激活實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了FAPON VHH活化T細(xì)胞的功能。結(jié)果顯示，當(dāng)FAPON VHH包被到96孔板時(shí)，可以達(dá)到與SP34相當(dāng)?shù)幕罨?，而?dāng)FAPON VHH不包板時(shí)則不會(huì)對(duì)T細(xì)胞產(chǎn)生活化作用。此外，用FAPON VHH構(gòu)建的TCE雙抗在僅有T細(xì)胞的情況下同樣也不會(huì)激活T細(xì)胞。FAPON VHH介導(dǎo)T細(xì)胞活化的過程具有明確依賴性——需借助交聯(lián)作用或靶向結(jié)合方可完成，這一特性對(duì)保障TCE藥物的安全性具有顯著積極意義。

圖2. CD3抗體對(duì)T細(xì)胞的激活作用

▌非特異性結(jié)合低：TCE安全性與PK的額外保障

抗體的反應(yīng)特異性是發(fā)揮藥效和保證安全性的關(guān)鍵因素。對(duì)于CD3抗體也是同樣的問題。通過對(duì)Raji細(xì)胞的非特異性結(jié)合檢測(cè)和蛋白表面電荷結(jié)構(gòu)模擬分析，結(jié)果顯示對(duì)照的CD3 VHH PC與Raji細(xì)胞有顯著的非特異性結(jié)合，此外其抗體存在局部正電荷富集區(qū)域，而FAPON VHH則幾乎不與Raji細(xì)胞結(jié)合，且電荷的分布也更均勻。FAPON VHH的高反應(yīng)特異性優(yōu)勢(shì)顯著，這一特性在未來TCE藥物的設(shè)計(jì)與構(gòu)建過程中，將對(duì)提升藥物安全性、優(yōu)化藥代動(dòng)力學(xué)表現(xiàn)產(chǎn)生至關(guān)重要的正向影響。

圖3. CD3抗體的多反應(yīng)性（Polyreactivity）檢測(cè)分析

▌TCE應(yīng)用案例：安全性和有效性的雙重達(dá)標(biāo)

一款優(yōu)秀的CD3抗體，不僅要“能打”，還要“好用”——也就是能順利融入TCE雙抗、三抗的構(gòu)建中，同時(shí)具備良好的安全性，有效性以及成藥性等。為了覆蓋更多B細(xì)胞，達(dá)到更好的B細(xì)胞清除效果，研發(fā)人員將FAPON VHH與抗CD19以及抗BCMA的納米抗體融合，構(gòu)建了一系列的TCE雙抗和三抗分子，并對(duì)其有效性和安全性進(jìn)行了系統(tǒng)性的評(píng)估。

其中，由CD3-CD19-BCMA三納米抗體組成的 F9， 充分發(fā)揮出了CD19/BCMA雙靶點(diǎn)有更大范圍覆蓋的優(yōu)勢(shì)，在CD19與BCMA不同表達(dá)模式的腫瘤細(xì)胞模型中均表現(xiàn)出強(qiáng)效的殺傷活性，其效能與已經(jīng)獲批上市的CD19雙抗 Blinatumomab和BCMA雙抗Elranatamab以及Teclistamab相當(dāng)甚至更強(qiáng)。此外，其細(xì)胞因子分泌水平與已上市雙抗相近，未出現(xiàn)明顯的細(xì)胞因子風(fēng)暴風(fēng)險(xiǎn)。上述研究結(jié)果證實(shí)，基于FAPON VHH構(gòu)建的TCE三抗在體外活性實(shí)驗(yàn)中兼具優(yōu)異的殺傷活性與良好的安全性。

圖4. TCE分子的殺傷和細(xì)胞因子分泌

為進(jìn)一步驗(yàn)證體內(nèi)藥效，研究人員在人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）重建的免疫缺陷小鼠中開展對(duì)比實(shí)驗(yàn)。在Naml-6 和 NCI-H929不同表達(dá)模式的原位荷瘤腫瘤模型上，F(xiàn)9均能夠在較低的濃度下展現(xiàn)出非常顯著的抑瘤效果。上述結(jié)果證實(shí)，基于FAPON VHH構(gòu)建的TCE三抗在兩種小鼠荷瘤模型中均有良好的體內(nèi)有效性。

圖5. TCE分子的體內(nèi)藥效

▌TCE應(yīng)用案例：結(jié)構(gòu)多元與成藥性出色的雙重兼具

相較于常規(guī)抗體，納米抗體在設(shè)計(jì)成多抗時(shí)具有顯著優(yōu)勢(shì) —— 可徹底規(guī)避輕重鏈錯(cuò)配問題，為多樣化結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)提供充足空間。在研發(fā)實(shí)踐中，菲鵬制藥在不同項(xiàng)目里積極探索，通過整合共刺激元件、各類 TAA 抗體等，開展了豐富的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)工作，涉及的結(jié)構(gòu)類型多達(dá)百余種。對(duì)這些分子的成藥性初步評(píng)估結(jié)果顯示，絕大部分分子不僅表達(dá)水平理想，且純度表現(xiàn)優(yōu)異。這充分證明，FAPON VHH在與不同元件組合進(jìn)行多元結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)時(shí)，既能保障結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)的靈活性，又能滿足良好的成藥性標(biāo)準(zhǔn)。以下僅列出部分結(jié)構(gòu)作為示例。

圖6. 不同結(jié)構(gòu)TCE分子在早研瞬轉(zhuǎn)水平下的的成藥性數(shù)據(jù)示例

▌FAPON VHH較同類CD3納米抗體，人猴交叉與殺傷活性“雙優(yōu)”

高性能 CD3 納米抗體具有較大的市場(chǎng)需求，隨著技術(shù)研發(fā)的深入推進(jìn)，近年來不斷有新的 CD3 納米抗體開發(fā)成果被公開報(bào)道。本研究選取專利已披露的 4 款 CD3 納米抗體作為對(duì)照，與 FAPON這款 CD3 納米抗體進(jìn)行人猴交叉結(jié)合活性橫向比較。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在與人 PBMC 及猴 PBMC 的結(jié)合反應(yīng)中，F(xiàn)APON VHH 的結(jié)合活性顯著高于另外 4 款 CD3 納米抗體，特別是在猴交叉反應(yīng)活性上，表現(xiàn)出遠(yuǎn)超其他分子的優(yōu)勢(shì)。此外，當(dāng)所有 CD3 納米抗體均與相同的抗 TAA 抗體組合形成結(jié)構(gòu)相同的 TCE 雙抗后，F(xiàn)APON VHH 構(gòu)建的 TCE 雙抗在殺傷活性上依舊顯著優(yōu)于由其他 CD3 分子構(gòu)建的 TCE 雙抗。

圖7. 不同CD3納米抗體的活性比較

▌不同親和力CD3抗體改造，滿足多樣需求

在藥物開發(fā)領(lǐng)域，CD3 抗體的應(yīng)用正朝著多元化方向快速拓展，涵蓋體內(nèi)雙特異性 T 細(xì)胞銜接器（TCE）、體內(nèi)嵌合抗原受體 T 細(xì)胞（in vivo CAR-T）、T 細(xì)胞受體工程化 T 細(xì)胞（TCR-T）以及其他各類 T 細(xì)胞靶向治療等研究方向。值得注意的是，不同應(yīng)用場(chǎng)景對(duì) CD3 抗體的親和力需求存在顯著差異。基于此，本研究以人源化親本分子為基礎(chǔ)，開展了一系列 CD3 抗體親和力定向改造工作。結(jié)果顯示：經(jīng)過親和力改造后，獲得了不同親和力的CD3抗體，大部分抗體在改造過程中仍保有猴交叉結(jié)合活性。這些不同親和力的CD3納米抗體序列，為未來探索提供了更多可能性。

圖8. CD3納米抗體的親和力改造

▌總結(jié)與展望：開放合作，共推TCE研發(fā)加速

從 “人猴交叉結(jié)合” 的核心優(yōu)勢(shì)，到 “激活 T 細(xì)胞” 的功能保障，再到 “適配多抗” 所體現(xiàn)的體外活性與成藥潛力，加之 “體內(nèi)抑瘤 + 安全” 的雙重驗(yàn)證，這款 CD3 納米抗體為 TCE 研發(fā)提供了“少走彎路” 的優(yōu)質(zhì)選擇 —— 它不僅能攻克臨床前動(dòng)物模型驗(yàn)證的痛點(diǎn)，更可憑借優(yōu)異的成藥性與安全性，降低后續(xù)研發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。

菲鵬制藥依托自主研發(fā)的納米抗體序列庫，成功搭建起具有特色的 T 細(xì)胞銜接器（TCE）技術(shù)平臺(tái)。該序列庫覆蓋 T 細(xì)胞激活的第一信號(hào)、第二信號(hào)及偏向性激活相關(guān)靶點(diǎn)，其配套的納米抗體元件不僅具備良好的人- 猴交叉反應(yīng)活性，還可靈活適配多樣化的分子結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)需求。與此同時(shí)，菲鵬制藥同步推進(jìn)多條優(yōu)質(zhì)創(chuàng)新管線的內(nèi)部開發(fā)，研究領(lǐng)域覆蓋腫瘤與自身免疫性疾病兩大方向。在加速自有管線臨床轉(zhuǎn)化進(jìn)程的基礎(chǔ)上，公司亦積極開展對(duì)外授權(quán)合作，以開放共享的模式賦能生物醫(yī)藥行業(yè)的協(xié)同創(chuàng)新與高質(zhì)量發(fā)展。

若您希望進(jìn)一步了解菲鵬制藥CD3納米抗體項(xiàng)目及合作信息，歡迎通過以下方式與菲鵬聯(lián)系！

BD郵箱：BDAP@fapon.com

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