先天恐懼是動物和人類規(guī)避危險的自然反應(yīng)，嚙齒類動物主要通過嗅覺系統(tǒng)感知捕食者氣味（如狐貍糞便成分），產(chǎn)生主動回避和被動僵住兩種核心行為，以維持生存和心理健康。

嗅覺回避與躲避測試

（Olfactory avoiding and avoidance test）

該測試是研究nTMT誘導(dǎo)小鼠先天恐懼行為的核心，分為“躲避行為記錄”和“回避行為量化”兩部分，核心是通過3D運(yùn)動捕捉追蹤小鼠對nTMT的主動規(guī)避反應(yīng)。

實(shí)驗(yàn)場景與設(shè)備：

測試空間：圓形開闊場（高度40cm、直徑50cm），四角安裝4臺高清數(shù)字相機(jī)以30幀/秒的速率記錄小鼠行為，確保捕捉行為細(xì)節(jié)的連續(xù)性和準(zhǔn)確性。

刺激物處理：將蘸有未稀釋nTMT的濾紙置于密封盒中（避免操作時泄漏），實(shí)驗(yàn)時放在小鼠的對側(cè)位置，作為先天恐懼刺激源。

前期適應(yīng)：實(shí)驗(yàn)前先讓小鼠在測試空間中適應(yīng)，減少環(huán)境陌生感對行為的干擾。

行為定義與記錄規(guī)則：

嗅覺回避測試（Olfactory avoiding test）：聚焦小鼠對nTMT的即時躲避動作，判斷依據(jù)包括小鼠的鼻尖朝向、與濾紙的靠近動作及距離。當(dāng)小鼠鼻尖與濾紙中心的距離超過20mm時，記為“躲避信號開始”；當(dāng)小鼠鼻尖朝向發(fā)生改變（不再遠(yuǎn)離濾紙）時，記為“躲避信號結(jié)束”，以此界定單次躲避行為的時間窗口。

關(guān)鍵量化指標(biāo)：

僵住時間（Freezing time）：通過追蹤小鼠身體上16個特征點(diǎn)，將小鼠除呼吸外保持靜止超過3秒的時長定義為僵住時間，反映被動恐懼反應(yīng)。

回避指數(shù)（Avoidance index）：用于標(biāo)準(zhǔn)化回避時間，計算公式為“回避指數(shù)=(P-50)/50”，其中P是小鼠在測試時間內(nèi)（10分鐘）處于無濾紙區(qū)的時間占比（百分比），該指數(shù)可消除個體活動差異對結(jié)果的影響，更精準(zhǔn)比較不同組小鼠的回避程度。

對照驗(yàn)證：為排除氣味特異性干擾，采用相同方法測試小鼠對花生醬（偏好氣味）和2-庚酮（中性氣味）的反應(yīng)，對比分析nTMT誘導(dǎo)行為的特殊性。

腦聲常談建立了多個《動物模型構(gòu)建與行為評估》交流群，群內(nèi)分享各種經(jīng)典和前沿的行為范式，共同交流解決動物實(shí)驗(yàn)中遇到的棘手問題，避坑少走彎路！有需要的老師可以掃碼添加微信進(jìn)入討論群！

嗅覺聯(lián)想記憶測試

（Olfactory associative memory test）

該測試用于評估對小鼠嗅覺聯(lián)想記憶的影響，核心是利用小鼠“氣味-食物”的先天聯(lián)想能力，通過三階段實(shí)驗(yàn)量化記憶能力變化。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計邏輯：基于小鼠先天能通過氣味尋找食物的特性，通過“適應(yīng)-訓(xùn)練-回憶”三階段，觀察小鼠是否聯(lián)想記憶受損。

操作流程

適應(yīng)階段（Habituation phase）：在40×40×30cm的開闊場中放置兩個相同物體，將小鼠從遠(yuǎn)離物體的側(cè)邊中央放入，讓其適應(yīng)環(huán)境10分鐘（第1天），消除對測試空間和物體的陌生感。

訓(xùn)練階段（Training phase）：在兩個物體上分別放置相同奶酪（一個置于物體頂部，隱藏但可散發(fā)氣味；一個置于另一個物體后方），每天訓(xùn)練小鼠10分鐘，持續(xù)6天，讓小鼠建立“特定物體位置-奶酪氣味”的聯(lián)想。

回憶階段（Recall phase）：第8天移除奶酪，進(jìn)行行為測試，記錄小鼠到達(dá)“曾放置奶酪位置”的時間，該時間被定義為“潛伏期（Latency）”潛伏期越長，說明嗅覺聯(lián)想記憶越弱。

埋藏食物顆粒測試

（Buried food pellet test）

該測試用于評估小鼠的氣味檢測能力（反映嗅覺閾值）。

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

小鼠處理：實(shí)驗(yàn)前將小鼠單獨(dú)飼養(yǎng)并禁食24小時，確保其有尋找食物的動機(jī)；

測試環(huán)境：在26×17×12cm的測試籠中鋪設(shè)3cm厚的墊料，實(shí)驗(yàn)前讓小鼠在籠中適應(yīng)10分鐘；

刺激物放置：將200mg食物顆粒埋在墊料下約0.5cm處，每次實(shí)驗(yàn)隨機(jī)改變食物顆粒位置，并更換新鮮墊料，避免氣味殘留干擾。

行為記錄與對照驗(yàn)證

核心指標(biāo)：記錄小鼠從放入籠中到用前爪發(fā)現(xiàn)并抓取食物顆粒的時間，即“尋食潛伏期”。潛伏期越長，說明氣味檢測能力越弱（嗅覺閾值越高）。

對照實(shí)驗(yàn)：為排除“運(yùn)動能力或?qū)な硠訖C(jī)變化”對結(jié)果的干擾，在埋藏食物顆粒測試后進(jìn)行“視覺食物顆粒測試”：將食物顆粒放在墊料表面，觀察小鼠的尋食潛伏期，若兩組（對照組vs實(shí)驗(yàn)組）無差異，則證明運(yùn)動能力和動機(jī)正常，僅嗅覺檢測能力可能存在差異。

Fig1小鼠對捕食者氣味（nTMT）的行為反應(yīng)

呈現(xiàn)了小鼠在nTMT刺激下的行為表現(xiàn)。A、D圖是實(shí)驗(yàn)場景，B、C、E圖通過距離、速度等指標(biāo)，展示小鼠在nTMT存在時會產(chǎn)生遠(yuǎn)離刺激源等回避行為，還會出現(xiàn)僵?。‵reezing）狀態(tài)，體現(xiàn)出對捕食者氣味的先天恐懼反應(yīng)。

實(shí)驗(yàn)場景使用了3D運(yùn)動捕捉和3D重建技術(shù)（3D motion-capture and 3D reconstruction）。具體來說，在一個圓形開闊場（高度40cm，直徑50cm）中，在場地的四個角落配備了四臺高清數(shù)字相機(jī)，以30幀每秒的速度記錄小鼠的行為。通過這些相機(jī)捕捉小鼠在場地中的運(yùn)動信息，進(jìn)而利用相關(guān)技術(shù)實(shí)現(xiàn)對小鼠行為的3D重建，以便后續(xù)精確分析小鼠在面對刺激（如捕食者氣味nTMT）時的行為表現(xiàn)，例如移動軌跡、與刺激源的距離等。

這種方法可以較為精準(zhǔn)地追蹤小鼠的行為變化，為研究小鼠對捕食者氣味的回避和躲避等行為提供詳細(xì)的數(shù)據(jù)支持。

總結(jié)

從行為角度深入理解動物對捕食者氣味的反應(yīng)機(jī)制，為進(jìn)一步研究人類恐懼相關(guān)行為（如焦慮癥、創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙等精神疾病中出現(xiàn)的恐懼反應(yīng)異常）的神經(jīng)基礎(chǔ)提供參考，為相關(guān)疾病的干預(yù)提供潛在靶點(diǎn)和治療思路。

文獻(xiàn)引用：

• Xu H, Yuan H, Song H, Pan Y, Wu Z, Wang S, Cheng J, Luo Y, Lin L, Min P, Yue Y, Chen X, Zhang K, Fukunaga K, Sasaki T, Mao X, Han F, Lu YM. Multimode neural population coding of diverse innate fear response by mitral and tufted cells. Cell Rep. 2025 Sep 8;44(9):116255. doi: 10.1016/j.celrep.2025.116255. Epub ahead of print. PMID: 40924580.

腦聲小店基于深度科研洞察，專注為動物實(shí)驗(yàn)提供"簡器械·精實(shí)驗(yàn)"解決方案。我們突破高精設(shè)備局限，開發(fā)手工定制化儀器及配件，通過科研巧思將基礎(chǔ)工具轉(zhuǎn)化為創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)方案。產(chǎn)品涵蓋行為學(xué)裝置、操作輔助工具等，使實(shí)驗(yàn)室在保持操作簡效的同時，實(shí)現(xiàn)精細(xì)化數(shù)據(jù)采集，助力科研人員以創(chuàng)造性思維發(fā)掘簡易儀器的潛在科研價值。