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Introduction

肥胖作為一種全球性的流行性代謝疾病，被認(rèn)為從根本上是由能量攝入和能量消耗之間的長(zhǎng)期不平衡引起的。已經(jīng)鑒定出2 種類型的解偶聯(lián)蛋白1（UCP1）陽(yáng)性脂肪細(xì)胞，來(lái)自棕色脂肪組織（BAT）的經(jīng)典棕色脂肪細(xì)胞和來(lái)自白色脂肪組織（WAT）的米色脂肪細(xì)胞，可將儲(chǔ)存的化學(xué)能轉(zhuǎn)化為熱量。促進(jìn)棕色/米色脂肪細(xì)胞褐變以增加能量消耗，被認(rèn)為是對(duì)抗肥胖及其并發(fā)癥的有力治療策略。

越來(lái)越多研究報(bào)道能量攝入和消耗的晝夜節(jié)律紊亂，促進(jìn)了肥胖及其相關(guān)代謝疾病的發(fā)生及發(fā)展。生物鐘功能障礙增加了脂肪細(xì)胞儲(chǔ)存甘油三酯的能力，降低了脂肪細(xì)胞對(duì)各種激素的敏感性，最終導(dǎo)致肥胖和相關(guān)代謝疾病，如2型糖尿病。Per2是小鼠和人類生物鐘的重要組成部分。先前的研究表明，PER2 SNP（rs2304672 C > G 和rs4663302 C > T）與腹部肥胖和致肥胖行為密切相關(guān)。作為對(duì)冷暴露的反應(yīng)，核心時(shí)鐘蛋白Per2作為PPARα的共激活劑增加UCP1的表達(dá)以激活脂肪細(xì)胞褐變。另外一個(gè)核心時(shí)鐘基因Bmal1，通過(guò)直接轉(zhuǎn)錄控制TGF-β/BMP信號(hào)通路抑制棕色脂肪生成和產(chǎn)熱能力。

木犀草素（3',4',5,7-四羥基黃酮）是一種最常見(jiàn)的類黃酮之一，廣泛分布于許多食用和藥用植物中，如芹菜、菠菜和金銀花。在最近的報(bào)道中，木犀草素可以通過(guò)肝臟和脂肪組織之間的相互作用來(lái)改善肥胖的發(fā)展及其并發(fā)癥。之前的研究表明，木犀草素增強(qiáng)了高脂飲食（HFD）或低脂飲食（LFD）喂養(yǎng)小鼠的棕色脂肪細(xì)胞活性和米色脂肪細(xì)胞的形成。然而，目前尚不清楚晝夜節(jié)律時(shí)鐘基因和時(shí)鐘控制基因的節(jié)律表達(dá)是否介導(dǎo)了木犀草素對(duì)飲食誘導(dǎo)的肥胖和脂肪細(xì)胞褐變的影響。

因此，合肥工業(yè)大學(xué)的鄭磊、劉健等，在本研究利用HFD喂養(yǎng)的野生型（WT）小鼠，探討了飲食補(bǔ)充木犀草素對(duì)能量代謝和脂肪組織UCP1晝夜節(jié)律的影響。隨后，在小鼠的脂肪組織和肝臟中檢測(cè)時(shí)鐘蛋白Per2和Bmal1的節(jié)律改變。此外，利用Per2缺失（Per2-/-）小鼠揭示了Per2介導(dǎo)了肝臟PPARα/RXRα/FGF21信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而闡明Per2通過(guò)削弱肝臟PPARα/RXRα/FGF21通路阻斷木犀草素誘導(dǎo)的小鼠脂肪細(xì)胞褐變。

結(jié)果與討論

膳食木犀草素（木犀草素）改善了高脂飲食（HFD）誘導(dǎo)的野生型（WT）小鼠能量代謝節(jié)律紊亂

圖1 膳食木犀草素（木犀草素）改善了高脂飲食（HFD）誘導(dǎo)的野生型（WT）小鼠的肥胖和能量代謝節(jié)律紊亂

5周齡雄性C57BL/6 WT小鼠分別給予LFD、HFD和HFD + 0.01%木犀草素喂養(yǎng)12周。與LFD相比，HFD導(dǎo)致小鼠體質(zhì)量（圖1A）和代謝組織質(zhì)量（圖1B）增加加劇，血清脂質(zhì)和葡萄糖水平增高（圖S1）。相反，膳食木犀草素顯著逆轉(zhuǎn)了這些不良的代謝變化（圖1A和B），這與課題組之前的研究結(jié)果一致。同時(shí)，3組處理的小鼠攝食量無(wú)顯著性差異（圖1C）。與LFD喂養(yǎng)的小鼠相比，HFD喂養(yǎng)的小鼠表現(xiàn)出活動(dòng)量下降（圖1D）。有趣的是，膳食木犀草素顯著增加了小鼠的自主活動(dòng)（圖1D），表明木犀草素增加了小鼠的能量消耗。HFD喂養(yǎng)小鼠的O2消耗和CO2產(chǎn)生顯著降低，晝夜節(jié)律表達(dá)較弱，飲食木犀草素處理顯著增加了這兩個(gè)參數(shù)的水平（圖1E和F）。與LFD小鼠相比，HFD組小鼠BAT中UCP1蛋白水平在夜間降低，導(dǎo)致晝夜節(jié)律減弱（圖1G）。在HFD喂養(yǎng)的小鼠SAT中，由于UCP1在所有時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量很低，幾乎失去了其晝夜節(jié)律（圖1H）。雖然膳食木犀草素未能完全恢復(fù)LFD喂養(yǎng)小鼠UCP1的節(jié)律性表達(dá)，但在夜間，顯著提高了BAT和SAT中UCP1的水平（圖1G和H）。因此，膳食木犀草素通過(guò)增加脂肪組織棕脂化，改善了HFD喂養(yǎng)的WT小鼠能量消耗的晝夜紊亂。

膳食木犀草素同步提高HFD喂養(yǎng)的WT小鼠肝臟PER2表達(dá)和脂肪組織UCP1水平

圖2 膳食木犀草素（木犀草素）改善了高脂飲食（HFD）誘導(dǎo)的野生型（WT）小鼠BAT、SAT和肝臟核心時(shí)鐘基因的節(jié)律性表達(dá)

為了評(píng)估核心生物鐘基因在調(diào)節(jié)脂肪組織UCP1水平中的作用，本研究接下來(lái)檢測(cè)了BAT和SAT中PER2和BMAL1的表達(dá)。與LFD小鼠相比，HFD小鼠BAT和SAT中PER2和BMAL1的表達(dá)水平較低，且振幅較?。▓D2A和B）。相反，膳食木犀草素促進(jìn)了這2 種生物鐘蛋白的節(jié)律性表達(dá)，基本完全恢復(fù)到LFD 小鼠中的節(jié)律性表達(dá)（圖2A和B）。在HFD + 0.01%木犀草素喂養(yǎng)小鼠脂肪組織中，核心時(shí)鐘蛋白和UCP1之間的表達(dá)模式不同步，表明來(lái)自其他組織的晝夜節(jié)律信號(hào)可能調(diào)節(jié)脂肪組織棕脂化。

肝臟是負(fù)責(zé)類黃酮利用的重要器官，也是食物攝入后最典型的外周生物鐘表達(dá)模型。因此，作者進(jìn)一步檢測(cè)了肝臟中核心生物鐘蛋白的表達(dá)。HFD小鼠在所有時(shí)間點(diǎn)的肝臟PER2水平均低于LFD小鼠，即PER2節(jié)律平緩（圖2C）。有趣的是，膳食木犀草素有效地增加了夜間PER2的蛋白水平（圖2C），這與木犀草素激活的SAT和BAT中UCP1的表達(dá)相似（圖2A和B）。相對(duì)于PER2水平的變化，所有小鼠中BMAL1表達(dá)的變化要弱得多（圖2C）。結(jié)果表明，膳食木犀草素可能通過(guò)肝臟PER2介導(dǎo)的信號(hào)通路促進(jìn)HFD WT小鼠脂肪組織棕脂化。

木犀草素節(jié)律性激活HFD喂養(yǎng)的WT小鼠肝臟PPARα/RXRα/FGF21信號(hào)通路

圖3 膳食木犀草素（木犀草素）節(jié)律性激活高脂飲食（HFD）誘導(dǎo)的野生型（WT）小鼠PPARα/RXRα/FGF21信號(hào)通路

為了解膳食木犀草素是否通過(guò)脂肪組織和肝臟之間的相互作用激活脂肪組織棕脂化，進(jìn)一步檢測(cè)了與脂肪組織UCP1表達(dá)和系統(tǒng)性能量代謝有關(guān)的關(guān)鍵肝臟激素：FGF21。在LFD喂養(yǎng)的小鼠中，肝臟和血清FGF21水平展現(xiàn)出強(qiáng)烈的晝夜節(jié)律變化，峰值出現(xiàn)在08:00時(shí)（圖3A和B）。與LFD相比，HFD顯著下調(diào)了肝臟中FGF21的mRNA和蛋白水平，并削弱了其節(jié)律性表達(dá)（圖3A和C）。肝臟FGF21合成減少嚴(yán)重降低了HFD小鼠08:00的血清FGF21水平（圖3B）。相反，木犀草素顯著提高了肝臟和血清中FGF21水平，尤其是在08:00時(shí)間點(diǎn)（圖3C）。PPARα與RXRα異源二聚體可以誘導(dǎo)肝臟中FGF21的節(jié)律性表達(dá)，于是課題組進(jìn)一步檢測(cè)了木犀草素是否通過(guò)PPARα/RXRα信號(hào)促進(jìn)FGF21水平。與LFD相比，HFD顯著降低了肝臟中

PPAR

RXR

PPAR

RXR

Per2基因敲除消除了高脂喂養(yǎng)小鼠中木犀草素誘導(dǎo)的脂肪組織棕脂化

圖4 膳食木犀草素（木犀草素）不調(diào)節(jié)高脂飲食（HFD）誘導(dǎo)的Per2-/-小鼠的能量代謝

鑒于在HFD喂養(yǎng)的WT小鼠中木犀草素介導(dǎo)的肝臟PER2和脂肪組織UCP1的同步化，作者推測(cè)PER2在木犀草素激活的能量消耗中起關(guān)鍵作用。因此，對(duì)Per2-/-小鼠進(jìn)行為期12周的HFD和HFD + 0.01%木犀草素喂養(yǎng)，包括以下三組：HFD喂養(yǎng)的WT小鼠、HFD喂養(yǎng)的Per2-/-小鼠、HFD喂養(yǎng)的Per2-/-小鼠膳食補(bǔ)充木犀草素。發(fā)現(xiàn)三組小鼠中O2消耗和CO2產(chǎn)生等代謝參數(shù)、BAT和SAT中UCP1的幅度和水平均無(wú)顯著差異（圖4）。這些數(shù)據(jù)表明，在HFD喂養(yǎng)的小鼠中，Per2缺失阻斷了木犀草素激活的脂肪組織棕脂化。

Per2缺失減弱肝臟PPARα/RXRα/FGF21通路

圖5 木犀草素對(duì)PPARα/RXRα/FGF21通路的影響在HFD喂養(yǎng)的Per2-/-小鼠中弱于WT小鼠

鑒于膳食木犀草素促進(jìn)脂肪組織棕色化并影響肝臟PPARα/RXRα/FGF21通路（圖1和3），課題組接下來(lái)檢測(cè)了Per2-/-小鼠中木犀草素對(duì)PPARα/RXRα/FGF21通路的影響。WT小鼠中木犀草素引起的FGF21變化百分比遠(yuǎn)大于Per2-/-小鼠（圖5A和B）。例如，WT小鼠血清FGF21在08:00的增加量為84.05 %，高于Per2-/-小鼠觀察到的28.81%（圖5B）。與WT小鼠組相比，Per2-/-小鼠飲食木犀草素引起的Pparα和Rxrα mRNA水平的增率顯著降低（圖5C和D）。在8:00，WT小鼠的Pparα水平上調(diào)至128.80 %，約為Per2-/-小鼠（39.04 %）的3 倍（圖5C）。綜上所述，Per2的缺失削弱了膳食木犀草素對(duì)PPARα/RXRα/FGF21通路的影響。

木犀草素直接增加了WT小鼠原代培養(yǎng)肝細(xì)胞中PPARα/RXRα/FGF21分子的表達(dá)，而對(duì)Per2-/-小鼠無(wú)影響

圖6 木犀草素直接增加了WT小鼠原代培養(yǎng)肝細(xì)胞中PPARα/RXRα/FGF21分子的表達(dá)，而對(duì)Per2-/-小鼠無(wú)影響

為了確認(rèn)木犀草素對(duì)肝臟的直接作用，使用10 μmol/L 木犀草素處理分別來(lái)自WT和Per2-/-小鼠的原代肝細(xì)胞。在WT小鼠原代肝細(xì)胞中，木犀草素刺激18~24 h的Pparα和Rxrα的mRNA水平。下游靶基因Fgf21在木犀草素刺激18 h后顯著增加（圖6C）。與此相反，木犀草素對(duì)Per2-/-小鼠（圖6A~C）原代培養(yǎng)肝細(xì)胞Pparα、Rxrα和Fgf21的mRNA表達(dá)影響較小。這些結(jié)果表明，木犀草素直接激活WT小鼠原代培養(yǎng)肝細(xì)胞中的肝臟PPAR α/RXRa/FGF21通路，而不是Per2-/-小鼠。綜上所述，飲食補(bǔ)充木犀草素促進(jìn)WT小鼠SAT和BAT中脂肪細(xì)胞產(chǎn)熱，而Per2敲除后，通過(guò)減弱PPARα/RXRα/FGF21通路，阻礙木犀草素誘導(dǎo)的脂肪組織棕脂化（圖6D）。

Conclusion

這項(xiàng)研究揭示了在HFD喂養(yǎng)的小鼠中膳食補(bǔ)充木犀草素可激活肝臟PER2介導(dǎo)的 PPARα/RXRa/FGF21 信號(hào)，促進(jìn)脂肪細(xì)胞褐變。膳食補(bǔ)充木犀草素改善了HFD喂養(yǎng)的WT小鼠能量消耗的異常晝夜節(jié)律，而核心時(shí)鐘基因Per2缺失消除了膳食補(bǔ)充木犀草素對(duì)HFD喂養(yǎng)的Per2-/-小鼠脂肪組織褐變和產(chǎn)熱的影響。

第一作者簡(jiǎn)介

水珊珊，食品科學(xué)博士/博士后，副教授，浙江海洋大學(xué)食品與藥學(xué)學(xué)院專任教師，主要研究方向?yàn)樗a(chǎn)食品分子營(yíng)養(yǎng)，水產(chǎn)品加工及貯藏。主持國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目、舟山市科技專項(xiàng)、研究生教育質(zhì)量系列工程項(xiàng)目等5 項(xiàng)；參與國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目、國(guó)家自然科學(xué)基金聯(lián)合基金項(xiàng)目、浙江省高等教育“十四五”教學(xué)改革項(xiàng)目、浙江省“十四五”研究生教學(xué)改革項(xiàng)目等6 項(xiàng)；以第一或通訊作者發(fā)表sci和中文高質(zhì)量期刊論文20余篇；參與申請(qǐng)或授權(quán)國(guó)家專利11 項(xiàng)；獲浙江省優(yōu)秀研究生教學(xué)案例、舟山市自然科學(xué)優(yōu)秀論文等獎(jiǎng)項(xiàng)；指導(dǎo)學(xué)生成功申報(bào)省部級(jí)及以上項(xiàng)目4 項(xiàng)、獲省部級(jí)及以上獎(jiǎng)項(xiàng)3 項(xiàng)。

陳娟，博士，碩士生導(dǎo)師，生物醫(yī)學(xué)工程專業(yè)，合肥工業(yè)大學(xué)食品與生物工程學(xué)院講師。研究方向：利用生物信息多組學(xué)研究方法，從RNA編輯視角研究重大代謝疾病發(fā)生機(jī)理，并關(guān)注食品源天然黃酮小分子改善機(jī)體代謝的調(diào)控機(jī)理研究。主持國(guó)家級(jí)項(xiàng)目1 項(xiàng)，安徽省自然科學(xué)基金1 項(xiàng)。近五年來(lái)，以第一作者或通訊作者在Journal of Agricultural and Food Chemistry、Phytomedicine、Communications biology等國(guó)際著名期刊發(fā)表學(xué)術(shù)論文多篇；指導(dǎo)學(xué)生獲得省部級(jí)及以上獎(jiǎng)項(xiàng)3 項(xiàng)。

通信作者簡(jiǎn)介

劉健，博士/博士后，教授，博士生導(dǎo)師，“黃山學(xué)者”特聘教授。中國(guó)生物物理學(xué)會(huì)代謝生物學(xué)分會(huì)理事，安徽省檢驗(yàn)檢測(cè)學(xué)會(huì)理事長(zhǎng)、安徽省生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)副理事長(zhǎng)、安徽省細(xì)胞生物學(xué)會(huì)常務(wù)理事，高質(zhì)量學(xué)術(shù)期刊Journal of Nutritional Biochemistry、Food Science and Human Wellness編委。研究領(lǐng)域：肥胖與代謝疾病調(diào)控機(jī)制研究及相關(guān)食藥產(chǎn)品開(kāi)發(fā)；近10年來(lái)，主持國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目等縱橫向項(xiàng)目10余項(xiàng)，團(tuán)隊(duì)總到賬經(jīng)費(fèi)逾1 000萬(wàn)元。發(fā)表高質(zhì)量論文40余篇。

鄭磊，博士/研究員，博士生導(dǎo)師，現(xiàn)任合肥工業(yè)大學(xué)校長(zhǎng)，“黃山學(xué)者”特聘教授、“食品安全”中青年創(chuàng)新群體帶頭人。本科及碩士、博士均畢業(yè)于中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)，“郭沫若獎(jiǎng)”獲得者?，F(xiàn)為校學(xué)位委員會(huì)委員、校學(xué)術(shù)委員會(huì)委員兼生化材料學(xué)部主任、安徽省農(nóng)業(yè)生態(tài)與質(zhì)量安全產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系副首席專家、中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)會(huì)生物節(jié)律專業(yè)委員會(huì)委員、國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品/特殊膳食食品抽檢監(jiān)測(cè)牽頭工作專家委員會(huì)委員，《科技導(dǎo)報(bào)》、《食品科學(xué)》、《食品工業(yè)科技》等核心期刊編委，省部級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室學(xué)術(shù)委員會(huì)委員。主要從事食品安全分析檢測(cè)、腸道營(yíng)養(yǎng)健康研究，以及物質(zhì)科學(xué)與生命科學(xué)交叉領(lǐng)域的研究工作，主持國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃“食品安全重點(diǎn)專項(xiàng)”項(xiàng)目“糧油食品供應(yīng)鏈危害物識(shí)別與防控技術(shù)研究”等項(xiàng)目十余項(xiàng)，以第一完成人獲省部級(jí)科技獎(jiǎng)勵(lì)一等獎(jiǎng)1 項(xiàng)、三等獎(jiǎng)1 項(xiàng)，參與制修訂國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)6 項(xiàng)，發(fā)表高質(zhì)量論文100余篇。指導(dǎo)的研究生獲安徽省“互聯(lián)網(wǎng)+”大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)大賽金獎(jiǎng)和全國(guó)“研究生智慧城市技術(shù)與創(chuàng)意設(shè)計(jì)大賽”優(yōu)勝獎(jiǎng)。

Deficiency of circadian gene Per2 blocks luteolin-induced adipocyte browning in mice through weakening liver PPARα/RXRα/FGF21 pathway

Shanshan Shuia,b,1, Juan Chena,1, Yan Lina, Jingjing Yuana, Xin Wanga, Xian Zhanga, Jian Liua,c,*, Lei Zhenga,c,*

a School of Food and Biological Engineering, Hefei University of Technology, Hefei 230009, China

b Key Laboratory of Health Risk Factors for Seafood of Zhejiang Province, College of Food Science and Pharmacy, Zhejiang Ocean University, Zhoushan 316022, China

c Engineering Research Center of Bio-process, Ministry of Education, Hefei University of Technology, Hefei 230009, China

1These authors contribute equally.

*Corresponding authors.

Abstract

During the development of diet-induced obesity, the change of energy matebolism is closely related to the function of the circadian clock in mammals. Luteolin (LU), one of the most common natural flavonoids riched in many edible plants, can ameliorate obesity by activating adipose tissue browning, but its effect on circadian clock in this process remains poorly understood. Here we found that dietary LU improved circadian misalignment of energy expenditure in high-fat diet (HFD)-fed wild-type (WT) mice. Moreover, dietary LU efficiently elevated uncoupling protein 1 levels in adipose tissue during the dark period, which was similar to the LU-increased hepatic PER2 expressions. Hepatic peroxisome proliferators-activated receptors α (PPARα)/recombinant retinoid X receptor α (RXRα)/fibroblast growth factor 21 (FGF21) pathway was rhythmically elevated by dietary LU in HFD-fed WT mice, whereas the promotion was inhibited in Per2-/- mice. Meanwhile, Per2 deletion abolished the effects of dietary LU on adipose tissue browning in HFD-fed mice. Further, LU treatment directly activated PPARα/RXRα/FGF21 signaling in primary cultured hepatocytes from WT mice rather than Per2-/- mice. Taken together, the deletion of the core clock component Per2 impedes LU-induced adipose tissue browning through weakening PPARα/RXRα/FGF21 pathway in mice, providing a new insight into the interplay of energy metabolism and circadian clock for the anti-obesity activity of LU.

Reference:

SHUI S S, CHEN J, LIN Y, et al.Deficiency of circadian gene Per2 blocks luteolin-induced adipocyte browning in mice through weakening liver PPARα/RXRα/FGF21 pathway[J]. Food Science and Human Wellness, 2025, 14(3): 9250058. DOI:10.26599/FSHW.2024.9250058.

本文編譯內(nèi)容由作者提供

編輯：王佳紅；責(zé)任編輯：孫勇

封面圖片：圖蟲(chóng)創(chuàng)意