摘要：5T4作為癌胚抗原，在多種實(shí)體瘤中高表達(dá)且正常成人組織中幾乎無(wú)表達(dá)，是理想的腫瘤治療靶點(diǎn)。本研究篩選出高親和力種系樣人源單克隆抗體m603，其對(duì)5T4具有高特異性和結(jié)合活性?；趍603構(gòu)建的ADC藥物和第三代CAR-T細(xì)胞，在體外展現(xiàn)出強(qiáng)效的抗原依賴(lài)性殺傷作用，在胰腺癌異種移植模型中實(shí)現(xiàn)了持久的腫瘤抑制甚至清除，且安全性良好，為5T4陽(yáng)性實(shí)體瘤的免疫治療提供了全新且高效的策略。

一、靶點(diǎn)選對(duì)，治療成功一半：5T4成實(shí)體瘤新靶點(diǎn)

實(shí)體瘤的治療一直是腫瘤領(lǐng)域的難題，找到腫瘤特異性靶點(diǎn)是突破的關(guān)鍵。5T4作為癌胚抗原，在乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌等多種實(shí)體瘤中高表達(dá)，還和腫瘤的晚期進(jìn)展、不良預(yù)后密切相關(guān)。更重要的是，這個(gè)靶點(diǎn)在正常成人組織中幾乎不表達(dá)，且抗體結(jié)合后會(huì)快速內(nèi)吞，完美適配ADC和CAR-T這類(lèi)依賴(lài)靶點(diǎn)內(nèi)吞或膜定位的治療方式，妥妥的實(shí)體瘤治療“潛力股”。

二、千挑萬(wàn)選，高活性抗體m603脫穎而出

研究團(tuán)隊(duì)從含1.5×1011個(gè)克隆的人源Fab噬菌體展示文庫(kù)中，經(jīng)四輪篩選得到m603和m605兩款抗5T4抗體。將其轉(zhuǎn)化為IgG1型后，m603的EC??低至0.19nM，對(duì)5T4的結(jié)合親和力遠(yuǎn)高于m605（圖1）。更難得的是，m603與種系基因的同源性達(dá)96.9%，是種系樣抗體，這類(lèi)抗體免疫原性更低，成藥潛力更強(qiáng)。

在多種腫瘤細(xì)胞系的結(jié)合實(shí)驗(yàn)中，m603展現(xiàn)出碾壓性?xún)?yōu)勢(shì)：10nM濃度下就能與所有5T4陽(yáng)性細(xì)胞強(qiáng)效結(jié)合，對(duì)陰性細(xì)胞幾乎無(wú)結(jié)合；而m605不僅需要更高濃度，還存在非特異性結(jié)合（圖3）。不管是結(jié)合活性還是特異性，m603都是當(dāng)之無(wú)愧的最優(yōu)選擇。

三、雙管齊下，m603打造強(qiáng)效ADC藥物

基于m603的優(yōu)異特性，研究團(tuán)隊(duì)構(gòu)建了兩款ADC藥物：分別偶聯(lián)微管抑制劑DM4（m603-DM4）和MMAE（m603-MMAE），經(jīng)檢測(cè)，兩者的平均藥物抗體比（DAR）分別為4.72和4.16，處于臨床ADC的理想范圍（圖4）。體外實(shí)驗(yàn)中，兩款A(yù)DC對(duì)5T4陽(yáng)性細(xì)胞均有濃度依賴(lài)性殺傷作用，對(duì)陰性細(xì)胞則無(wú)毒性，其中m603-MMAE的殺傷效果更顯著，對(duì)胰腺癌BxPC-3細(xì)胞的IC??僅0.25nM。

更關(guān)鍵的是，m603-MMAE能高效內(nèi)吞，4小時(shí)內(nèi)的內(nèi)吞效率接近50%，保證了細(xì)胞毒藥物能順利進(jìn)入腫瘤細(xì)胞發(fā)揮作用。在胰腺癌BxPC-3異種移植模型中，m603-MMAE靜脈給藥后，實(shí)現(xiàn)了所有小鼠的腫瘤生長(zhǎng)完全抑制，且60天無(wú)復(fù)發(fā)，對(duì)照組則無(wú)明顯抑瘤效果，小鼠也未出現(xiàn)明顯體重下降，安全性拉滿(mǎn)。

四、強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)合，603z-CAR-T實(shí)現(xiàn)實(shí)體瘤高效清除

除了ADC，研究團(tuán)隊(duì)還基于m603構(gòu)建了第三代CAR-T細(xì)胞（603z-CAR-T），融合了4-1BB和CD28雙共刺激結(jié)構(gòu)域，這一設(shè)計(jì)能大幅提升CAR-T細(xì)胞的活化和殺傷能力（圖5）。體外實(shí)驗(yàn)中，603z-CAR-T與5T4陽(yáng)性細(xì)胞共培養(yǎng)后，會(huì)大量分泌IFN-γ和IL-2等效應(yīng)細(xì)胞因子，且在效靶比10:1時(shí)，能實(shí)現(xiàn)近100%的腫瘤細(xì)胞殺傷，對(duì)陰性細(xì)胞則無(wú)明顯作用。

在胰腺癌異種移植模型中，輸注603z-CAR-T的小鼠腫瘤生長(zhǎng)被顯著抑制，生存期也大幅延長(zhǎng)，而空載T細(xì)胞組的腫瘤則持續(xù)生長(zhǎng)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，小鼠的體重保持穩(wěn)定，沒(méi)有出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)，說(shuō)明這款CAR-T細(xì)胞不僅高效，還兼具良好的安全性（圖6）。

五、前景無(wú)限，m603為實(shí)體瘤治療打開(kāi)新窗口

這款種系樣抗體m603的出現(xiàn)，讓5T4靶點(diǎn)的治療價(jià)值得到了充分驗(yàn)證。它不僅能打造出強(qiáng)效的ADC藥物，還能構(gòu)建出高活性的CAR-T細(xì)胞，兩種療法均在胰腺癌模型中展現(xiàn)出優(yōu)異的治療效果，且安全性良好。值得注意的是，ADC的療效不僅和靶點(diǎn)表達(dá)量相關(guān)，還和腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性、內(nèi)吞動(dòng)力學(xué)有關(guān)，這也為后續(xù)ADC的研發(fā)提供了新的思路。

而603z-CAR-T的成功，也為實(shí)體瘤CAR-T治療帶來(lái)了新突破。雙共刺激結(jié)構(gòu)域的設(shè)計(jì)提升了殺傷活性，種系樣抗體的低免疫原性則降低了治療風(fēng)險(xiǎn)，解決了實(shí)體瘤CAR-T治療的部分痛點(diǎn)。未來(lái)，m603還能拓展到雙特異性抗體、CAR-NK等多種治療形式，為5T4陽(yáng)性實(shí)體瘤患者提供更多元的治療選擇。

目前，針對(duì)5T4的靶向治療仍處于早期研發(fā)階段，而m603為基礎(chǔ)的療法在臨床前研究中展現(xiàn)出的亮眼數(shù)據(jù)，讓我們看到了實(shí)體瘤治療的新希望。相信隨著后續(xù)研究的推進(jìn)，這款抗體能快速走向臨床，為更多實(shí)體瘤患者帶來(lái)生的希望。

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