撰文丨章臺(tái)柳

KRAS 癌基因是人類中突變最廣泛的癌基因之一，也是肺癌、結(jié)直腸癌和胰腺癌的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因素。 KRAS 突變也發(fā)生在一些不那么普遍但同樣致命的癌癥中，例如膽道癌、食管癌、子宮內(nèi)膜癌、胃癌、卵巢癌和宮頸癌，但這些癌癥對(duì)異常 KRAS 信號(hào)通路的依賴性尚不明確 。

膽管癌（CCA） 是一組來(lái)源于膽道的異質(zhì)性癌癥，分為肝內(nèi)膽管癌、肝門周圍膽管癌（兩者也稱為肝外膽管癌）或遠(yuǎn)端膽管癌。全球范圍內(nèi)，膽管癌的發(fā)病率正在上升，目前約占所有原發(fā)性肝癌的 15% 和胃腸道惡性腫瘤的 3% 。唯一的治愈性選擇是手術(shù)，但僅限于局部膽管癌患者。盡管晚期膽管癌的治療取得了進(jìn)展，包括將免疫治療納入基于化療的標(biāo)準(zhǔn)治療方案，但由于其診斷時(shí)已是晚期以及對(duì)常規(guī)治療的耐藥性，膽管癌的預(yù)后仍然很差。對(duì)膽管癌基因組圖譜的精細(xì)探索揭示了癌基因（如 KRAS 、 IDH1/2 、 BRAF 或 PI3K ）和抑癌基因（如 TP53 、 ARID1A 、 BAP1 或 SMAD4 ）的突變，以及其他致癌驅(qū)動(dòng)因子（如 FGFR 和 ERBB2 ）的易位和擴(kuò)增，這導(dǎo)致了針對(duì) FGFR2 融合和 IDH1 突變亞群的靶向療法的開(kāi)發(fā)和臨床批準(zhǔn)。其他基因組亞群，例如那些攜帶 KRAS 突變的亞群，是否可能從 RAS(ON) 多選擇性抑制劑 （ 這類抑制劑能夠靶向經(jīng)典 RAS 亞型突變型和野生型變體的活性、 GTP 結(jié)合狀態(tài) ） 等靶向療法中獲益，仍有待探索。

KRAS 是膽管癌中最常發(fā)生突變的癌基因之一，約四分之一的患者存在突變。無(wú)論解剖位置如何， KRAS G12D 等位基因突變?cè)谀懝馨┲凶顬槠毡�，而在肝外膽管癌中觀察到第 12 密碼子（如 G12C ）或第 13 密碼子（如 G13D ）的其他突變，在肝內(nèi)膽管癌中檢測(cè)到第 61 密碼子（如 Q61H ）的突變。 KRAS 突變與基因組亞群中最差的臨床結(jié)局相關(guān)。致癌 KRAS 信號(hào)對(duì)膽管癌發(fā)生的基本貢獻(xiàn)最初是通過(guò)在基因工程小鼠模型中肝臟特異性表達(dá)突變 Kras 等位基因以及通過(guò)水動(dòng)力尾靜脈注射遞送的基于轉(zhuǎn)座子的系統(tǒng)得以證實(shí)的。鑒于 RAS(ON) 多選擇性抑制劑 可 靶向在膽管癌中發(fā)現(xiàn)的 KRAS 突變等位基因，因此 有必要 在臨床前模型中對(duì)這些廣譜抑制劑進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)估，對(duì)于描繪其在患者中臨床實(shí)施的路線圖至關(guān)重要。

來(lái)自 納瓦拉大學(xué)應(yīng)用醫(yī)學(xué)研究中心 的 Silve Vicent 、 Rodrigo Entrialgo-Cadierno 和來(lái)自美國(guó)革命醫(yī)藥公司的 Jingjing Jiang 團(tuán)隊(duì) 在 Cancer Cell 雜志上發(fā)表文章 Anticancer activity of RAS-GTP inhibition in cholangiocarcinoma ，在臨床前模型及KRAS突變型CCA患者中研究了RAS（ON）多選擇性抑制劑的活性。RAS(ON) 多選擇性抑制劑在細(xì)胞來(lái)源和患者來(lái)源的異種移植模型以及免疫完整同種移植模型中均產(chǎn)生了強(qiáng)效的抗癌反應(yīng)。與這些臨床前發(fā)現(xiàn)一致，兩例晚期 KRAS G12 CCA 患者在接受 RAS(ON) 多選擇性抑制劑達(dá)拉索西布（ daraxonrasib ）治療后 表現(xiàn)出 臨床活性。抑制RAS-GTP還能增強(qiáng)當(dāng)前CCA標(biāo)準(zhǔn)治療方案在細(xì)胞來(lái)源的人源異種移植模型和小鼠同種移植模型中的活性，從而延長(zhǎng)生存期。此外， 揭示了 內(nèi)在獲得性及對(duì) RAS(ON) 多選擇性抑制劑的獲得性耐藥性主要依賴于驅(qū)動(dòng) RAS 信號(hào) 再 激活的機(jī)制�？偠灾�， 這項(xiàng)研究的 發(fā)現(xiàn)表明KRAS突變型CCA的增殖依賴于RAS信號(hào)，并支持在CCA中進(jìn)行RAS-GTP抑制的潛在臨床評(píng)估。

研究人員 在多株人 KRAS 突變型和野生型細(xì)胞系以及永生化非癌性人膽管細(xì)胞中測(cè)試了 RMC-7977 （一種代表研究性藥物達(dá)拉索西布的藥理特性、可用于臨床前研究的工具化合物） 。 RMC-7977 對(duì) KRAS 突變型細(xì)胞系 的生長(zhǎng)抑制 比在野生型等位基因細(xì)胞系中高 50 倍 。 RMC-7977 對(duì) 從患者來(lái)源異種移植獲得的有 KRAS 突變的膽管癌細(xì)胞系 以及小鼠模型細(xì)胞系同樣具有高水平的抑制能力。蛋白水平分析顯示， RMC-7977 能夠持久抑制 RAS 通路 ，并 導(dǎo)致了凋亡的誘導(dǎo)，表現(xiàn)為裂解的 caspase 3 表達(dá)增強(qiáng)，并隨抑制劑濃度和處理時(shí)間的增加而增加。 即證明了 膽管癌細(xì)胞系對(duì)致癌 RAS 信號(hào)通路的依賴性。

研究人員評(píng)估了 RMC-7977 在體內(nèi)膽管癌模型中的抗腫瘤效應(yīng) 。 使用了四種細(xì)胞來(lái)源異種移植模型（ EGI.1 、 HUCTC1 、 SNU-869 和 KKU-213A ）和五種患者來(lái)源異種移植模型（ PDX41 、 PDX120 、 CTG-0011 、 CTG-1480 和 LIV-254 ）， 都觀察到顯著的抗腫瘤活性。分析藥代動(dòng)力學(xué)與 RAS 信號(hào)抑制 （通過(guò) KRAS-MAPK 轉(zhuǎn)錄靶點(diǎn) DUSP6 的 mRNA 定量） 之間的關(guān)系，結(jié)果表明兩者具有相關(guān)性，表現(xiàn)出對(duì) RAS 信號(hào)傳導(dǎo)具有相似的依賴性。 KRAS 突變型膽管癌細(xì)胞的體內(nèi)生長(zhǎng)依賴于激活的 KRAS 信號(hào)傳導(dǎo)，與 KRAS 驅(qū)動(dòng)的其他癌癥（如非小細(xì)胞肺癌和胰腺導(dǎo)管腺癌）相當(dāng)。 同時(shí)在免疫完整的小鼠中分別使用 KPh 、 hKP 和 iAKP 細(xì)胞系建立皮下模型， RMC-7977 在 KPh 和 hKP 模型中都誘導(dǎo)了持續(xù)的腫瘤消退， 但 在治療開(kāi)始后約 25 天觀察到腫瘤復(fù)發(fā) 。 RMC-7977 處理顯著抑制 iKAP 模型的腫瘤生長(zhǎng)。進(jìn)一步分析顯示， iAKP 細(xì)胞中存在多個(gè)突變 Kras 拷貝，并且在持續(xù) RMC-7977 治療一個(gè)月后，這些拷貝發(fā)生了進(jìn)一步擴(kuò)增 。 這種 Kras 擴(kuò)增同時(shí)表現(xiàn)為均勻染色區(qū)和染色體外 DNA ，且 這種基因組擴(kuò)增是突變 Kras 等位基因所特有的 。

為了進(jìn)一步 探索 RAS-GTP 抑制的 應(yīng)用 轉(zhuǎn)化潛力， 研究人員 在 3 種模型中 評(píng)估了 RMC-7977 與化療（ CT ：吉西他濱和順鉑）、免疫治療（ IT ：抗 PD-1 ）或模擬局部晚期或轉(zhuǎn)移性膽管癌標(biāo)準(zhǔn)治療方案的三聯(lián)療法（ CT/IT ）的組合 的抗腫瘤功效 。 相比于單藥治療，無(wú)論是 RMC -7977+ CT ，還是 RMC -7977+ CT + IT 均顯著提升抗腫瘤治療效果，延長(zhǎng)無(wú)進(jìn)展生存期，且不影響小鼠體重。 這些臨床前結(jié)果表明，在 KRAS 突變型膽管癌中， RAS(ON) 多選擇性抑制劑與標(biāo)準(zhǔn)治療方案聯(lián)合應(yīng)用可能比單藥產(chǎn)生更持久的抗癌反應(yīng)。 同時(shí)， 評(píng)估達(dá)拉索西布單藥治療既往經(jīng)治的晚期實(shí)體瘤患者安全性、耐受性和初步活性的首次人體臨床試驗(yàn) 開(kāi)始招募，并報(bào)道了兩例晚期 KRAS G 12 膽管癌患者接受治療后表現(xiàn)出臨床活性，提示 潛在 的臨床療效。

研究人員對(duì) RMC -7977 處理后引起的基因表達(dá)和蛋白水平變化進(jìn)行評(píng)估。 RMC-797 7 誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄變化與致癌 KRAS 信號(hào)通路的消除高度一致，其特征是已建立的 KRAS 突變基因表達(dá)特征的逆轉(zhuǎn) 。 典型的 KRAS 效應(yīng)因子，包括轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 MYC 和 FOSL1 ，被顯著抑制。 GO 分析顯示，下調(diào)的生物學(xué)通路富集了增殖和生存軸，包括 E2F 和 MYC 靶點(diǎn)、 DNA 修復(fù)、 PI3K-AKT-mTOR 信號(hào)傳導(dǎo)、未折疊蛋白反應(yīng)和 IL2-STAT5 信號(hào)傳導(dǎo)。相反，上調(diào)的生物學(xué)通路包括干擾素 -γ 和 IFNα 反應(yīng)、缺氧和上皮 - 間充質(zhì)轉(zhuǎn)化 （ EMT ） 。由于 EMT 已被認(rèn)為是等位基因特異性 KRAS 抑制劑適應(yīng)性耐藥的機(jī)制， 結(jié)果 表明這些補(bǔ)償程序在治療后 24 小時(shí)就已啟動(dòng)。 蛋白水平方面， RMC -7977 處理導(dǎo)致 SHP2 激活顯著增加， HRAS 和 MRAS 過(guò)表達(dá) ，且在小鼠和人膽管癌臨床前模型中保守，在體外和體內(nèi)保持一致。即 對(duì) RAS(ON) 多選擇性抑制的分子反應(yīng)是高度保守的。 鑒于 SHP 2 激活的顯著增加，研究人員 評(píng)估了通過(guò)同時(shí)抑制 RAS-GTP （ RMC-7977 ）和 SHP2 （ RMC-4550 ）來(lái)“加倍打擊” RAS 通路的治療潛力。 體外和體內(nèi)模型都顯示，兩者的聯(lián)用具有協(xié)同效果，使獲得性耐藥出現(xiàn)的時(shí)間延長(zhǎng)了一倍，可以控制對(duì) RMC-7977 內(nèi)在耐藥 的腫瘤生長(zhǎng)，延長(zhǎng)總生存期。表明 最大化 RAS 通路抑制 在 克服膽管癌中的致癌信號(hào)通量和耐藥性 的潛力。

總的來(lái)說(shuō)，這項(xiàng)研究確定了KRAS突變型膽管癌對(duì)RAS的基本依賴性，并對(duì)廣譜RAS-GTP抑制劑達(dá)拉索西布作為單藥或聯(lián)合用藥進(jìn)行全面的臨床前和臨床評(píng)估，揭示出其應(yīng)用于KRAS突變型膽管癌治療的潛力。

原文鏈接：https://www.cell.com/cancer-cell/fulltext/S1535-6108(26)00174-1

制版人： 十一

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