近日，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院 /動(dòng)物疫病防控全國重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室黃耀偉教授團(tuán)隊(duì)在《Virulence》在線發(fā)表題為"Cleavage of cellular substrate porcine gasdermin D by porcine torovirus 3C-like protease induces pyroptosis"的研究工作首次鑒定出一種新發(fā)病毒——豬凸隆病毒（PToV）主要蛋白酶的宿主底物，豬gasdermin D（pGSDMD）。

套式病毒目（Nidovirales）的冠狀病毒科和動(dòng)脈炎病毒科成員包括多種危害人類與經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的致病病毒，如SARS-CoV-2、PEDV、PRRSV等。該病毒目還有一種可以感染哺乳動(dòng)物的凸隆病毒（torovirus），長期以來沒有得到關(guān)注。凸隆病毒是冠狀病毒的“近親”，但已經(jīng)從冠狀病毒科分出，獨(dú)立成為新的一個(gè)病毒科Tobaniviridae。凸隆病毒在經(jīng)濟(jì)動(dòng)物中（豬、牛、馬等）感染率較高，近年發(fā)現(xiàn)其在野生動(dòng)物與水生脊椎動(dòng)物中也廣泛存在，并與冠狀病毒發(fā)生交叉重組。凸隆病毒基因組結(jié)構(gòu)與編碼蛋白與冠狀病毒類似，同樣編碼3C樣蛋白酶（3CLP）這一病毒主要蛋白酶（MPro）用于剪切病毒多聚蛋白前體pp1a及pp1ab，產(chǎn)生多種成熟的非結(jié)構(gòu)蛋白。而RNA病毒的3CP或3CLP除了剪切加工宿主多聚蛋白外，還靶向切割多種宿主蛋白底物使其失活，有利于拮抗宿主抗病毒反應(yīng)包括先天免疫應(yīng)答，使病毒適應(yīng)在宿主細(xì)胞的生存。凸隆病毒與冠狀病毒的3CLP在催化位點(diǎn)及底物識(shí)別方面有一定差異，前者為絲氨酸蛋白酶，而后者為半胱氨酸蛋白酶。迄今已報(bào)道了冠狀病毒及動(dòng)脈炎病毒的3CLP的多種宿主底物，但凸隆病毒3CLP的特異性宿主底物還沒有被發(fā)現(xiàn)。

本研究發(fā)現(xiàn)了第一種可以被凸隆病毒家族成員3CLP識(shí)別的細(xì)胞底物蛋白pGSDMD。GSDMD是引發(fā)細(xì)胞焦亡的主要“執(zhí)行者”，此前已報(bào)道多種冠狀病毒3CLP通過剪切人和豬GSDMD從而抑制焦亡有助于病毒感染，但本研究則意外發(fā)現(xiàn)PToV 3CLP剪切pGSDMD的后果為促進(jìn)焦亡發(fā)生。PToV 3CLP是如何通過切割pGSDMD導(dǎo)致焦亡發(fā)生的？課題組分別對(duì)PToV 3CLP和pGSDMD進(jìn)行點(diǎn)突變研究，發(fā)現(xiàn)PToV 3CLP的兩個(gè)催化活性二聯(lián)體氨基酸His-53及Ser-160對(duì)剪切pGSDMD是必需的；而pGSDMD被3CLP在N端切出兩個(gè)片段：1-193與1-277，只有pGSDMD1-277片段通過在細(xì)胞膜成孔導(dǎo)致焦亡發(fā)生。當(dāng)Gln-277(Q277)突變后，PToV 3CLP不能識(shí)別該位點(diǎn)，pGSDMD1-277片段沒有被切開，則焦亡不再產(chǎn)生。已知在宿主細(xì)胞焦亡信號(hào)通路上，pCaspase-1切割pGSDMD的D279位產(chǎn)生pGSDMD1-279片段引起焦亡。因此，在機(jī)制上pGSDMD1-277通過模擬pGSDMD1-279片段發(fā)揮作用。相反，冠狀病毒（PEDV或PDCoV等）3CLP因?yàn)椴荒茏R(shí)別pGSDMD的Q277而只識(shí)別Q193，從而其后果是拮抗焦亡。

進(jìn)一步，PToV的3CLP切割pGSDMD這一細(xì)胞底物能否適用于其它動(dòng)物ToV對(duì)其對(duì)應(yīng)宿主GSDMD的識(shí)別？目前已發(fā)現(xiàn)了豬、牛、山羊、馬ToV（PToV，BToV，CToV，EToV），通過序列分析，它們對(duì)應(yīng)的不同種屬GSDMD在Q193位點(diǎn)高度保守，但是在277位，只有豬、牛、山羊的GSDMD是Q，而馬和人的GSDMD不是。因此推測(cè)只有牛和山羊的GSDMD也能被BToV與CToV 3CLP切割。這可能反映了凸隆病毒科不同種類的ToV 3CLP與對(duì)應(yīng)的宿主GSDMD底物之間在長期共演化過程中出現(xiàn)的“軍備競賽”結(jié)果。

由于豬腸道冠狀病毒與PToV在豬場中普遍存在，均引起仔豬腹瀉，但前者臨床致病性較強(qiáng)，而后者一般認(rèn)為較弱，這可以部分地通過其不同3CLP誘發(fā)焦亡的后果加以解釋：豬冠狀病毒3CLP抑制焦亡，有利于病毒在宿主細(xì)胞感染，而PToV 3CLP促進(jìn)焦亡釋放炎癥因子，限制了PToV的傳播。因此，盡管pGSDMD都是凸隆病毒和冠狀病毒3CLP的細(xì)胞識(shí)別底物，但是效應(yīng)則完全相反。

本研究鑒定出第一種被凸隆病毒3CLP識(shí)別的宿主底物GSDMD及在促進(jìn)細(xì)胞焦亡中的作用，為進(jìn)一步研究ToV的3CLP生化特征與功能奠定基礎(chǔ)。其次，意外發(fā)現(xiàn)PToV 3CLP剪切pGSDMD的后果與冠狀病毒3CLP的抑制焦亡作用相反，為研究套式病毒目不同成員，特別是冠狀病毒及其“近親”病毒的主要蛋白間差異、套式病毒與宿主相互作用的多樣性與復(fù)雜性提供了新的見解；同時(shí)也為解答豬場臨床生產(chǎn)實(shí)踐中仔豬腹瀉在不同病原感染下癥狀不盡相同的疑惑提供線索。